植物原生质体的交融技术探析植物原生质体的交融技术探析本文关键词：质体，探析，交融，植物，技术植物原生质体的交融技术探析本文简介：原生质体是组成细胞的一个形态构造单位,原生质体是指被去掉了细胞壁后的被细胞膜包围的裸露细胞“,是开展根底研究的主要材料。1960年英国科学家Cocking第一次用酶法大量制备原生质体,Cocking采纳的方法是在番茄幼苗的根组织中参加可降解细胞壁的等渗酶液,在一定条件下培养植物原生质体的交融技术探析本文内容：原生质体是组成细胞的一个形态构造单位,原生质体是指被去掉了细胞壁后的被细胞膜包围的裸露细胞“,是开展根底研究的主要材料。1960年英国科学家Cocking第一次用酶法大量制备原生质体,Cocking采纳的方法是在番茄幼苗的根组织中参加可降解细胞壁的等渗酶液,在一定条件下培养一段时间后,觉察大部分细胞的细胞壁被降解,从而制备出大量有活力的原生质体。1、原生质体交融的目的及意义原生质体交融技术可克服不同原生质体间的排挤力,使两种不同种属的原生质体间发生膜交融、胞质交融和核交融,进而构成具有含两种遗传物质的杂交细胞,克服远缘杂交的不亲和性和子代不育等障碍。另外,可转移优良的生物性状,实现基因重组,而改良现有品种。目前原生质体交融所改良的目的性状包括抗冻、抗干旱、抗病毒、抗虫、耐高盐等,还可按照人们预先的期望制造出新物种。2、原生质体的交融方法2.1、自发交融在酶解细胞壁构成原生质体的过程中,相邻的原生质体会因细胞间胞间连丝的扩展和粘连而彼此交融构成同核体(homokaryon)。每个同核体内可包含两个或多个核,这品种型原生质体的交融被称作为自发交融。多核交融体常出如今植物幼嫩叶片或分裂旺盛的培养细胞制备的原生质体中。如在玉米胚乳愈伤组织细胞和玉米胚悬浮细胞原生质体中,大约有50%是多核交融体。2.2、高pH-高Ca2+法通常情况下,Ca2+阻碍细胞交融的效率比Na+和K+要低,但是在高pH环境下,高浓度的Ca2+阻碍细胞交融的效率大大升高。该法以钙盐作诱导剂,在高Ca2+高pH的条件下,使原生质体发生交融。该种方法在1973年是由Keller和Melchers进展诱导烟草原生质体交融时制造的。详细是将两个原生质体的混合物放于含有7.35g/LCaCl22H2O和72.87g/L甘露醇的溶液中,pH值为10.5,在200rpm/min低速下离心3min,然后将离心管保持在37℃水浴锅中40~50min。但这种方法仅适宜叶肉原生质体的交融,同时要留意高pH环境对某些细胞生理活性产生的阻碍。2.3、聚乙二醇(PEG)法PEG是一种大分子量的水溶性多聚化合物。采纳PEG法,需将两种不同的原生质体以适宜比例混合后,参加28%~58%的PEG溶液处理15~30min,然后用培养基进展清洗后即可培养。后来有学者对PEG法进展了改良,即逐步降低PEG的浓度,提高溶液中Ca2+的浓度和pH值,使交融效果得到有效的提高。由于该法易于操纵、操作简单、促进细胞交融的才能较强、诱导的交融没有特异性,故被广泛选用。2.4、电交融法电交融法是指用细胞交融仪产生交变电压和高压脉冲电场,使粘连的原生质体膜瞬间破裂,然后与相邻的不同原生质体连接闭合产生交融体。黄家总等成功地利用电击细胞交融,使紫罗兰和桂竹香的原生质体交融。该种方法的优点是没有化学残留、对细胞的毒害作用较小、操作简单、交融率高、一次可交融大量原生质体。2.5、激光微束穿刺法激光微束穿刺法是利用聚焦到微米级的激光微束对组织进展穿刺,引起细胞膜的可逆性穿孔,从而导入外源DNA的一种基因直截了当转化方法。侯丙凯等初次用激光微束穿刺法照射油菜子叶叶柄,将杀虫蛋白基因导入油菜,经植物再生和卡那霉素选择,成功获得了抗虫转基因植株。此法对细胞的损伤较小,同时能够精确定位于被照射的细胞,但是因设备昂贵,故在大量培养消费中使用较少。2.6、亚原生质体交融植物亚原生质体主要包括3种,分别是核质体、胞质体和微原生质体,其中最常用的是胞质体和微原生质体。胞质体-原生质体交融被认为是获得胞质杂种、转移胞质因子最为有效的方法。如Sigareva等将大白菜原生质体与抗寒且具有Ogura型CMS特性的花椰菜胞质体交融,获得的胞质杂种具有抗寒与胞质雄性不育的特性,与传统方法相比,此法育种过程较短,消费效率更高。另外,微原生质体-原生质...
