ThermoFisherLCQFleet型液相色谱-质谱联用仪操作规程一、开机与关机1.开机前，先检查氮气和氦气的压力是否满足分析要求。打开氦气钢瓶（纯度>99.995%）压力表总阀，调节分压表到0.15MPa。打开氮气钢瓶（纯度>99.9%）压力表总阀，调节分压表到0.4~0.6MPa。2.打开FCQFleet总电源开关，机械泵开始工作。此时勿打开电子开关。在此状态下抽真空，抽真空的时间按照下表：项目123存好，再装上离子源。4.关机：关机顺序与开机顺序相反，无特殊情况或长假，质谱仪不关机。二、日常开机（机械泵未关闭时）1.开机前的准备工作1.1检查设备电源、流路、信号连接是否完好。1.2流动相：必须使用色谱纯的溶剂，若是选用进口的色谱纯试剂可以不经过微孔滤膜过滤，以免引入增塑剂等杂质。水或缓冲盐溶液要用新鲜制备的超纯水，经0.45um微孔滤膜抽真空过滤。夏天温度较高时，纯水或缓冲盐尽量每天更换，以免长菌。1.3流动相添加剂：不要使用无机酸、碱金属碱，它们会导致仪器腐蚀，推荐使用易挥发的有机酸和有机碱，如醋酸、甲酸、氨水等。表面活性剂易产生离子抑制作用，因而清洗用于液质的样品瓶等不要用洗涤精等表面活性剂。2.开机2.1先打开氮气总阀，慢慢调节分压表到0.5MPa。停机时间4d以上1-3d0.5d抽真空时间24h8h1h3.抽完真空后，打开电子开关。取下离子源，取下用于密封的APCI电晕针并保2.2依次打开FCQFleet主机上的电子开关、高效液相色谱仪、自动进样器和计算机。2.3仪器各部分开始自检。黑色的自检窗口显示质谱自检状态，待仪器显示待机状态时，仪器才可以正常使用。2.4打开计算机桌面上的“Instrumentconfiguration”软件，对仪器进行配置。具体方法如下：选择LCQFleetMS选项，选择configure，选择MSDetector，点击OK；选择DionexChromatographyMSLink，选择configure，点击OK；点击Done选项，仪器开始配置。2.5打开计算机桌面上的“ChromeleonXpress”软件，选择takeovercontrol，对高效液相色谱仪进行控制。设定流动相比例，打开Purge阀，在MoreOptions中选择Purge操作，对液相色谱中的管路进行排气。5min后排气结束，关闭Purge阀，设置流动相流速为0.2ml/min，稳定仪器。2.6打开“LCQtune”界面，对质谱仪各项参数进行设定。（1）离子源的选择：根据被分析样品的化学性质、分子量等选择不同的离子源。本机配置有ESI源（电喷雾离子源）和APCI源（大气压下化学电离离子源）。绝大多数的样品选用ESI源分析，尤其是有益于那些热不稳定化合物、中等到高极性化合物和大分子（蛋白/多肽）的样品分析。分子量较小的化合物、低极性到中等极性化合物等常选用APCI源进行分析。不同的离子源，液相流速也不一样。离子源ESI流速范围1µL/min-1mL/min最佳流速200µL/min说明一般来说,高流速需要高的毛细管温度和气体流速。一般来说，高流速需要更高的APCI200L/min-2mL/min500µL/min鞘气和辅助气流量，但不需要提高毛细管温度。对于ESI源，各项参数设定如下：液体流速Rate(µl/min)金属毛细管（℃）鞘气压力（arb）辅助气压力（arb）喷雾电压ISprayvoltage(kv)5.02001000**负离子模式（2）真空度：240350400535750520+3.5(-3.0**)+4.0(-3.5**)+4.5(-4.0**)当改变离子传输毛细管（或金属毛细管）的温度时一定要优化透镜电压在“LCQTune”质谱控制软件中，点击界面上的“Vacuum”按钮，观察质谱真空状态。在“IonGauge”选择“On”的情况下，要求达到以下参数：参数高真空（IonGaugePressure）前极真空（ConvectronGaugePressure）说明：a.高真空的数值越低，说明真空度越好；氦气使用完毕，或是未通氦气，也可能造成真空度很低。b.前极真空度的数值与离子源的温度有关，温度越高数值越小。三、方法和序列的建立1.建立分析方法打开计算机桌面上的Xcalibur软件，选择ThermoXcaliburRoadmap，选择Instrumentsetup，建立分析方法文件，分别对DionexChromatography和FCQFleetMS进行设定。在DionexChromatography中，需要设定柱温、泵、自动进样器等参数，在FCQFleetMS中设定质谱的采集时间、扫描模式、扫描范围以及正负离子检测模式等参数。一般而言，分析有机酸，选用负离子模式；有机碱，选用正离子模式。...
