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试验4植物细胞骨架的观察VIP免费

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中国海洋大学实验报告姓名:常天易系年级:海洋生命学院2012级专业:生物科学科目:分子细胞生物学实验学号:12050011006植物细胞骨架的观察一、实验目的:1.掌握植物细胞骨架处理及染色方法。2.对细胞骨架的形态和分布有一个初步认识。二、实验原理:真核细胞胞质中存在的纤维网状结构称为细胞骨架,包括:微管(直径20-25nm)、微丝(直径6-7nm)、中间丝(直径10nm)、和粗丝等。考马斯亮蓝R250是一种普通的蛋白质染料,它可以使各种细胞骨架蛋白着色,显示微丝组成的张力纤维。张力纤维(直径40nm)在体外培养细胞中普遍存在,与细胞对基质的附着,维持细胞扁平铺展的性状有关。三、实验材料洋葱表皮细胞试剂:1、0.01mol/L的磷酸盐缓冲液2、M-缓冲液3、1%TritonX-100/M-缓冲液4、30%戊二醛-PBS溶液四、实验方法撕取1平方厘米见方的洋葱表皮细胞,在培养皿中浸泡于PBS缓冲液中,使其沉底。去PBS溶液,加入1%TritonX-100处理30min去TritonX-100,使用M-缓冲液洗三遍,每次5min加入3%戊二醛溶液固定30min去戊二醛固定液,用PBS洗三遍,每次5min0.2%考马斯亮蓝R250染色10min将样品用蒸馏水洗2遍,将表皮细胞延展于在玻片上,显微镜下观察。五、实验结果核骨架六、思考题:1.洋葱表皮细胞中,质膜下,核围,胞质中的细胞骨架分布有无不同?答:质膜下细胞骨架比较稀疏,细胞膜骨架膜骨架(membraneskeleton)是质膜下与膜蛋白相连的由纤维蛋白构成的网架结构,普遍存在于各种细胞中,参与维持质膜的形状,并协助质膜完成多种生理功能。胞质中的细胞骨架比较均匀,主要有微管和纤丝组成,参与物质的运输,维持细胞的形态,参与细胞的运动,参与纺锤体的形成等作用。细胞核中染色最深,是因为细胞核骨架的存在,细胞核骨架包括染色体骨架,细胞质基质和核纤层。在图2中可以观察到细胞核中有好几处染色特别深(箭头所指处),为核仁的致密纤维成分。2.为什么实验中所看到的洋葱表皮细胞中的细胞骨架有的呈纤维状,有的呈串珠状?答:实验中所看到的洋葱表皮细胞中的细胞骨架有的呈纤维状,呈纤维状的细胞骨架主要成分是张力纤维的成分,用于维系整个细胞。呈念珠状的成分有:1.由于在处理条件下,细胞骨架不可避免的存在解聚,由于细胞骨架的解聚,呈现念珠状的细胞骨架。2.在微管上有运输的囊泡,也可以被染成蓝色。3.有的细胞器也可以沿着细胞而运动,所以也有可能被染成蓝色。七、总结与讨论观察到的细胞骨架为张力纤维,由微丝组成,直径40nm,参与细胞对基质的吸附1、实验中各个试剂的作用为:①、PBS溶液:保持细胞的形态②、TritonX-100通透细胞膜,溶解细胞膜,利于细胞内物质的释放,有利于染液的进入③、M-缓冲液,含有咪唑基,起到缓冲作用,其中含有的EDTA,螯合溶液中的Ca2+,在低钙条件下,骨架纤维保持聚合状态并且较为舒张④、戊二醛,固定细胞。之所以不用甲醛溶液,是因为戊二醛的固定效果更好,不会破坏细胞骨架2、由于细胞核中含有丰富的细胞核骨架包括核纤层、细胞核基质与染色体骨架构成,在考马斯亮蓝的染色下可以呈现蓝色

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