血球计数板的使用VIP免费

血球计数板的使用利用血球计数板在显微镜下可直观、快速计数微生物，由它计得的是活菌体和死菌体的总和，故又称为总菌计数法。一、血球计数板的介绍血球计数板，通常是一块特制的载玻片，其上由四条槽构成三个平台。中间的平台又被一短横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分九个大方格，中间的大方格即为计数室，微生物的计数就在计数室中进行。计数室的刻度一般有两种规格，一种是一个大方格分成16个中方格，而每个中方格又分成25个小方格，共400小格；另一种是一个大方格分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格，总共也是400小格。无论是哪种规格的计数板，每一个大方格中的小方格数都是相同的。每一个大方格边长为1㎜，则每一大方格的面积为1㎜2，盖上盖玻片后，载玻片与盖玻片之间的高度为0.1㎜，所以计数室的容积为0.1㎜3。其计算方法如下：1．25×16的计数板计算公式细胞数/ml=(80小格内的细胞数/80)×400×10000×稀释倍数=A/5×25×104×B12．16×25的计数板计算公式细胞数/ml=(100小格内的细胞数/100)×400×10000×稀释倍数=A/4×16×104×B二、操作过程1．稀释将酵母菌悬液进行适当稀释，菌液如不浓，可不必稀释。2．镜检计数室在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。若有污物，则需清洗后才能进行计数。3．加样品将清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，再用无菌的细口滴管将稀释的酵母菌液由盖玻片边缘滴一小滴，使菌液沿缝隙靠毛细渗透作用进入计数室，一般计数室均能充满菌液。注意不可有气泡产生。静置5—10分钟即可计数。4．显微镜计数将血球计数板置于显微镜载物台上，先用低倍镜找到计数室所在位置，然后换成高倍镜进行计数。在计数前若发现菌液太浓或太稀，需重新调节稀释度后再计数。一般样品稀释度要求每小格内约有5—10个菌体为宜。若选用25×16规格的计数板则每个计数室选5个中方格，可选4个角和中央的中格（即80个小格），若选用16×25规格的计数板，则数四个角：左上、右上、左下、右下的四个中方格，（即100小格）中的菌体进行计数。位于格线上的菌体一般只数上方和右边线上的。如遇酵母出芽，芽体大小达到母细胞的一半时，即作两个菌体计数。计数一个样品要从两个计数室中计得的值来计算样品的含菌量。5.对每个样品计数三次，取其平均值，计算每1ml菌液中所含的酵母菌个数。2各中格中菌数AB二室平均值菌数/ml12345第一室第二室A-五个中方格的总菌数B-稀释倍数6．清洗血球计数板血球汁数板使用后，用自来水冲洗，切勿用硬物洗刷，洗后自行晾干或用吹风机吹干。三、注意事项1、如何稀释？取1ml酵母菌培养液加入到盛有9ml蒸馏水的试管中，摇匀，再计数；如发现酵母菌的个数仍然过大，则同样再稀释一次，直至每小格中酵母菌的个数介于5-10，并作记录。2、调节显微镜光线的强弱适当，对于用反光镜采光的显微镜要注意光线不要偏向一边，否则视野中不易看清楚计数室方格线。3、因菌液在血球计数板处于不同空间，要在不同焦距下才能看全，所以，观察时必须不断调细螺旋（调焦距长短），方可找全。4、每个样品重复2—3次，若两次差别太大应重测。3