流式细胞术(FlowCytometry-FCM)描述VIP专享VIP免费

流式细胞术（FlowCytometry,FCM)作者：笛风1、流式细胞仪(FlowCytometer):是集光电子物理，光电测量，计算机，细胞荧光化学，单抗技术为一体的高科技细胞分析仪。2、流式细胞术(FlowCytometry):利用流式细胞仪对处于快速流动的细胞或生物颗粒进行多参数、快速（每秒可达1000-10000个）的定量分析和分选（纯度可达99%以上）的技术。基本概念流式细胞仪结构•激光光源及光束形成系统•流动室及液流驱动系统•光学系统：透镜、滤光片、小孔，聚焦光源，收集不同波长的荧光信号。•信号检测与分析：光电倍增管（PMT）、补偿电路。荧光信号转换为电信号，并将信号放大。•存储、显示、分析系统：计算机。•细胞分选系统流式免疫分型技术要点标本的获取和运输标本的制备和染色仪器的校准和质控流式细胞仪数据获取与储存FCM的主要测定指标FSC,SSC,FL1,FL2,FL3(FL4)其中：FSC：反映细胞的大小SSC：反映细胞内颗粒性FCM标记方法单标：一种单抗/tube:FL1,FSC,SSC（三参数）双标：（两种单抗/tube）：FL1,FL1,FSC,SSC（四参数）三/四标：（三种单抗/tube）（四种单抗/tube）：FL1-FL3/4,FSC,SSC荧光素种类FITC(异硫氰酸荧光素）：绿色530nmPE（藻红蛋白）：橙黄色575nmPerCP(多甲藻黄素叶绿素蛋白）：深红色675nmPI(碘化丙啶）：橙红色620nm488nm波长的氩离子激光激发APC(别藻兰蛋白）：红色660nm630nm波长的氦氖激光或红色二极管激光激发PE最强，适用于弱表达抗原FITC最便宜，适用于强表达抗原，适用范围广biotin-avidin不适合弱抗原的检测抗体的选择数据显示方式单参数直方图双参数二维点图等高图二维密度图三维图流式常见图形(HistogramPlot)流式细胞的主要信息:FluorescenceFL1FL2FL3FL4最常用的标记方法是荧光素分子标记的抗体与细胞抗原结合流式常见图形(HistogramPlot)适用于：单参数分析流式常见图形(DotPlot)适用于：多参数分析第二节流式细胞术的科研应用分析群体细胞所需时间短多参数分析定性或定量流式应用常见范围细胞大小细胞的颗粒度细胞表面分子：CD系列细胞浆内分子：胞内细胞因子细胞核内分子：P53细胞功能检测：细胞周期、凋亡抗体标记的方法抗体的选择首选直接标记抗体荧光分子PE最强，适用于弱表达抗原FITC最便宜，适用于强表达抗原间接标记：适用范围广,biotin-avidin不适合弱抗原的检测实验对照的设计空白对照：ALL阴性对照：常用同型抗体对照单色分析：设同型抗体对照多色分析：同型对照，单阳性对照（用于仪器校正）阳性对照：检测阴性时空白对照和阴性对照的比较：实验标本的处理单细胞悬液的制备：胰酶消化抗体或标记分子的染色：抗原抗体反应非特异结合的去除：洗涤和封闭封闭：血清和同型抗体流式检测应用实例凋亡细胞内分子检测凋亡检测-每一步都有检测试剂盒细胞周期G1MG2SQuiescentcellsG0细胞周期不能区分凋亡与死亡细胞Sub-G0/G1peaks---PIstainingCaspasesAnnexinVAssay建议用于悬浮细胞AnnexinVAssay能够区分死亡与凋亡流式“TUNEL”IntracellularCytokine-ProtocolSORTING（细胞分选）DIMERXantigenspecificTcellassaymethodformonitoringcellularresponseCBA(CytometricBeadArray)TraditionalAnalysis--PercentpositiveaCD3FITC104103102101100100101102103104TraditionalAnalysis—PercentPositivesCDXPEPositiveCellNegativeCellDeterminationoftheCD4PEABConlymphocytes110100100010000LinearFluorescenceinFL2102103104cellandbeadneglymphFL2;(49,000ABC)MoleculesPEperBead105第三节流式细胞术的临床应用白血病免疫分型HLA-B27:强直性脊柱炎淋巴细胞亚群造血干细胞计数：造血干细胞移植网织红细胞PNH诊断（CD55、CD59）血小板活化试验流式细胞白血病免疫分型流式细胞的免疫分型是白血病分型的重要指标FAB标准，形态学和免疫表型结合适合于白血病的分型诊断，但不适合用于确诊是不是白血病。Minimalresidualdiseases(MRD)FCM应用1、细胞增殖周期测定和DNA倍体分析2、凋亡检测3、免疫功能的检测4、血液学应用5、HLA-B27的检测：用于诊断强直性脊柱炎。6、其他：溶液中细胞因子的测量。7、细胞分选细胞增殖周期测定和DNA倍体分析1）细胞增...