流式细胞术流式细胞术FlowCytomFlowCytometryetry（（FCMFCM））什么是流式细胞仪●流式细胞仪实物BDFACSVantageBD-Calibur1.1.发展历史发展历史1934Moldavan1934Moldavan1973Steinkamp1973Steinkamp一、概述一、概述2.2.定义：对在高速流动的鞘液包括下对特异荧定义：对在高速流动的鞘液包括下对特异荧光标记的细胞、粒子进行光标记的细胞、粒子进行分析和分选分析和分选的技术的技术..3.3.特点特点测量速度快，每秒钟能测数千个乃至上万个测量速度快，每秒钟能测数千个乃至上万个细胞细胞可进行多参数测量可进行多参数测量在分析的同时可把具有指定特征的细胞分离在分析的同时可把具有指定特征的细胞分离出来，即分选技术。出来，即分选技术。凡是能被荧光素标记的细胞或颗粒都可用流式细胞仪检测。前提这种荧光素能被流式细胞仪所配置的激光光源激发在生物检测技术中流式细胞仪是不可多得的一机多用的仪器。4.应用范围二、流式细胞仪的工作原理和基本结构待测细胞以单个细胞的悬液，经特异性荧光染料染色，放入样品管，吸入流动室。流动室充满鞘液，作用：约束样品在喷嘴中心，防止样品靠近喷孔壁堵塞喷孔。细胞排成单列由喷嘴中心喷出，形成细胞液柱。液柱与激光束相交，细胞上的荧光染料被激发产生荧光。荧光信号变成电信号输出到计算机，软件分析。基本结构流动室和液流系统；流动室和液流系统；激光源和光学系统；激光源和光学系统；光电管和检测系统；光电管和检测系统；计算机和分析系统。计算机和分析系统。三、流式细胞仪可检测到的细胞参数非荧光信号非荧光信号颗粒度细胞大小=前向角散射光（FSC）细胞相对大小及其表面积=侧向角散射光（SSC）细胞颗粒度及细胞内细胞器的相对复杂性血液涂片外周全血细胞散射光双参数点图荧光信号荧光信号荧光强度（荧光强度（FLFL）：细胞上的荧光染料被激光激发后发射出）：细胞上的荧光染料被激光激发后发射出的荧光，不同的荧光染料其发射波长不同。的荧光，不同的荧光染料其发射波长不同。有荧光标记的细胞与无荧光标记的区分开来（阴阳）有荧光标记的细胞与无荧光标记的区分开来（阴阳）高高FLFL细胞与低细胞与低FLFL细胞区分开来（强弱）细胞区分开来（强弱）一般的流式细胞仪只装有一个激光光源（一般的流式细胞仪只装有一个激光光源（488nm488nm），可测出），可测出三个三个FLFL，即，即FL1FL1、、FL2FL2、、FL3FL3，大型的流式细胞仪装有，大型的流式细胞仪装有两个或三个激光光源（两个或三个激光光源（488nm488nm、、633nm633nm和和325nm325nm），可测），可测出出66个个FLFL。。荧光信号与细胞特性荧光信号与细胞特性荧光染料被激发而发射的光信号。定量染色荧光信号大小被标记组分含量的定量多荧光标记胞内多种组分，实现多参数测量二色镜123带通滤波片光电倍增管激光束细胞收集透镜前向散射光侧向散射光，荧光光信号分离，导向各探测通道接收并转化为电信号。光信号收集三数据处理及流式报告FSCSSCFL1FL2FL3对数线性线性线性对数脉冲处理，模数转换光信号电信号记录数据，显示结果（面积，峰高，宽度）流式报告的图一般分为四种，即散点图、直方图、密度图和二维等高图等。最常用的为散点图和直方图。几个概念：%Gated：阳性细胞百分比。反映细胞群体中阳性细胞的数量。Mean：平均荧光强度，与被检测物质的表达量有关，在正态分布时一般用该值。GeoMean：几何平均荧光强度，在阳性细胞为偏态分布时一般用该值。散点图密度图二维等高图直方图图报告中常见的几种流式细胞图R1File:4AcquisitionDate:06-Mar-03QuadEvents%GatedXMeanYMeanUL2542.4037.47461.36UR106710.08816.86468.89LL529149.9819.574.41LR397537.55418.809.87图AnnexinV/PI双标记分析细胞凋亡和坏死流式细胞仪数据分析点图分析流式细胞仪数据分析直方图分析图中100～101（M1）为阴性细胞，101以上的（M2）为阳性细胞五、流式细胞术的应用细胞结构细胞结构细胞大小细胞大小细胞颗粒度细胞颗粒度细胞表面积细胞表面积核浆比例核浆比例DNADNA含量与细胞含量与细胞周期周期RNARNA含量含量蛋...
