试验二细菌的染色和细菌细胞构造的观察VIP免费

微生物学实验海南大学海洋学院实验一细菌的形态和结构观察一、实验目的•观察细菌的菌落特征•掌握简单染色法和细菌涂片方法•在油镜下观察细菌个体的形态特征•形态观察主要包括群体的形态和个体的形态观察。•细菌的基本形态主要分为球菌、杆菌、螺旋菌三大类，近年还发现星状和四方形细菌等。细菌形态受培养时间、培养基成分、浓度、培养温度、培养时间等发生变化。•细菌菌落大多表面光滑湿润，有光泽，一般菌落较小，质地颜色均匀，同培养基结合不紧密。菌落特征与组成菌落的细胞结构、生长状况、排列方式、好气性和运动性直接相关。•细菌个体微小，较透明，必须染色方可呈现。根据细菌个体形态观察的不同要求，可将染色分为3种类型：简单染色、鉴别染色、特殊染色。二、实验的基本原理二、实验的基本原理•简单染色法原理：细菌在中性的环境中带负电荷，用碱性染料（解离时带正电荷）如美兰、结晶紫等进行染色。•采用加热或化学固定两种方法，使菌体粘附于玻片上，并且增加菌体对染料的亲和力三、实验材料•显微镜（显微镜灯）、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸等。•0.05%和0.1%吕氏碱性美蓝染色液，0.5%番红染液，中性红染液，二甲苯，生理盐水•细菌三种形态的染色标本。•大肠杆菌，金黄色葡萄球菌，哈氏弧菌和无乳链球菌24h液体培养基培养物•盖玻片、凹玻片、接种环、酒精灯。•简单染色法（一般染色法）１.菌种：牙垢细菌２.涂片３.干燥：自然气干或酒精灯高处微微加热。４固定５.染色：在整个涂面上滴加齐氏石炭酸复红，染色１分钟。６.水洗：倾去染液，用自来水细流冲洗至流下的水中无染料颜色为止。７干燥：空气中自然干燥。８镜检：在油镜下观察牙垢中的各种细菌形态并绘图。四、实验步骤四、实验步骤•油镜的使用1.用前检查：零件是否齐全，镜头是否清洁。2.调节光亮度3.低倍镜观察：粗调、细调4.依次再进行中倍、高倍观察5.油镜观察：高倍镜下找到清晰的物象后，提升聚光镜，在标本中央滴一滴香柏油，使油镜镜头浸入香柏油中，细调至看清物象为止。6.换片：另换新片，必须从第三条开始操作。7.用后复原：观察完毕，上悬镜筒，先用擦镜纸擦去镜头上的油，然后再用擦镜纸沾取少量二甲苯擦去残留的油，最后用擦镜纸擦去残留的二甲苯，后将镜体全部复原。•显微镜保养和使用中的注意事项：1.不准擅自拆卸显微镜的任何部件,以免损坏。2.镜面只能用擦镜纸擦，不能用手指或粗布，以保证光洁度3.观察标本时，必须依次用低、中、高倍镜，最后用油镜。当目视接目镜时，特别在使用油镜时，切不可使用粗调节器，以免压碎玻片或损伤镜面。4.观察时，两眼睁开，养成两眼能够轮换观察的习惯，以免眼睛疲劳，并且能够在左眼观察时，右眼注视绘图。5.拿显微镜时，一定要右手拿镜臂，左手托镜座，不可单手拿，更不可倾斜拿。6.显微镜应存放在阴凉干燥处，以免镜片滋生霉菌而腐蚀镜片。四、实验步骤•细菌三种基本形态的观察：菌落形态观察和个体形态观察，这里主要指个体形态的观察。1.结合油镜的使用，观察三张细菌染色片（球状菌、杆状菌、和螺旋状菌），边观察边绘图。2.看示范镜：观察双球菌、四联球菌，并绘图。四、实验步骤思考题•油镜与普通物镜在使用方法上有何不同？应特别注意些什么？•使用油镜时，为什么必须用镜头油？•镜检标本时，为什么先用低倍镜观察，而不是直接用高倍镜或油镜观察？实验二细菌的革兰氏染色一、实验目的•掌握细菌的革兰氏染色•进一步熟练掌握显微镜油镜的使用技术•观察和识别细菌细胞的特殊构造•细菌细胞壁的结构和组成存在差异，因此不同细菌对革兰氏染色有不同的反应（阳性和阴性）：•革兰氏阴性菌的细胞壁中含有较多脂类，肽聚糖层较薄、交联度低，当以95%酒精脱色时，脂类被溶解除去，使得细胞壁空隙变大，肽聚糖因95%酒精处理，其孔径会缩小，但由于肽聚糖含量较少，细胞壁孔径缩小有限，使得结晶紫与碘形成的紫色染料复合物被95%酒精洗脱出细胞壁之外，并被随后的红色复染剂染成红色；•革兰氏阳性菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，脂类含量少，经95%酒精脱色处理后，肽聚糖层的孔径缩小，通透性降低，使得结晶紫与碘形成的紫色...