蛋白质的结构与功能蛋白质的结构与功能StructureandFunctionofProteinStructureandFunctionofProtein(四)第四节蛋白质的理化性质一、蛋白质的理化性质二、蛋白质分离和纯化三、多肽链中氨基酸顺序分析——蛋白质一级结构的测定（一）两性解离和等电点及其分离纯化Pr是两性电解质。在溶液中的带电状况主要取决于溶液的pH值。PrCOOHNH3+PrCOO-NH3+PrCOO-NH2OH-H+OH-H+pH=pIpH
pIpI定义：在某一pH值溶液中，Pr酸性基团和碱性基团的解离程度相当Pr分子所带正负电荷相等，净电荷为零此时溶液的pH值称为Pr的pI。Pr分子颗粒大小1-100nm之间,属胶体颗粒范围，在溶液中能形成稳定的胶体。原因：（二）蛋白质的胶体性质表面形成水化层表面同种电荷的斥力除去这两个因素除去这两个因素,Pr,Pr就会发生沉淀。由就会发生沉淀。由于于胶体溶液中的胶体溶液中的PrPr不能通过半透膜，不能通过半透膜，因此可以应因此可以应用用透析法透析法将非蛋白的小分子杂质除去。将非蛋白的小分子杂质除去。（（三）蛋白质的变性、沉淀和凝固吴宪教授吴宪教授19311931年年：“天然：“天然PrPr分子借助次级分子借助次级键连接而成一种紧密，有规则的空间结构，键连接而成一种紧密，有规则的空间结构，变性作用使次级键破坏从而使结构松散”。变性作用使次级键破坏从而使结构松散”。1.蛋白质的变性(denaturation)定义：在某些理化因素的作用下，Pr严格的空间结构被破坏（不包括肽键的断裂），从而引起若干理化性质和生物学性质改变的现象。变性后的蛋白质称变性后的蛋白质称变性蛋白变性蛋白,,能使能使PPrr变性的物质叫变性的物质叫PrPr变性剂变性剂。。变性因素物理因素高温、高压紫外线、X射线、电离辐射和超声波等化学因素强酸、强碱有机溶剂、重金属盐高浓度尿素、盐酸胍等变性实质：破坏了空间结构，一级结构不受影响（分子组成、MW不变）。变性蛋白质的特点旋光性、光吸收改变等；①生物学活性丧失②理化性质改变③易被蛋白酶水解溶解度↓，沉降率↑，粘度↑，扩散速度↓，酶水解。变性与复性变性与复性变性可逆变性：Pr变性后如将变性剂除去，该Pr分子的天然构象和生物学活性还能恢复。不可逆变性：若变性条件强烈，作用时间长，构像变化大，理化性质难以恢复。举例：医疗；生物制品保存；生活等。RNaseRNase的变性与复性的变性与复性变性后的蛋白质由于疏水基团的暴露而易于沉淀，变性后的蛋白质由于疏水基团的暴露而易于沉淀，但沉淀的蛋白质不一定都是变性后的蛋白质。加热使蛋但沉淀的蛋白质不一定都是变性后的蛋白质。加热使蛋白质变性并凝聚成块状称为白质变性并凝聚成块状称为凝固凝固。因此，凡凝固的蛋白。因此，凡凝固的蛋白质一定发生变性。质一定发生变性。总结：总结：PrPr变性、沉淀与凝固之间的关系变性、沉淀与凝固之间的关系变性变性PrPr不一定沉淀沉淀不一定沉淀沉淀PrPr不一定变不一定变性性变性变性PrPr不一定凝固凝固的不一定凝固凝固的PrPr一定变一定变性性2.2.沉淀与凝固沉淀与凝固定义：定义：蛋白质分子相互聚集而从溶液中析出蛋白质分子相互聚集而从溶液中析出的现象称为的现象称为沉淀沉淀。。++++++++--------++++++++--------蛋白质胶体颗粒的沉淀蛋白质胶体颗粒的沉淀带正电荷的蛋白质带负电荷的蛋白质在等电点的蛋白质酸酸碱碱脱水脱水脱水不稳定的蛋白质颗粒（沉淀）带正电荷的蛋白质（疏水胶体）带负电荷的蛋白质（疏水胶体）碱酸（亲水胶体）（亲水胶体）（亲水胶体）大部分蛋白质均含有带共轭双键的大部分蛋白质均含有带共轭双键的TyrTyr和和TrpTrp。这两种。这两种AAAA在在280nm280nm附附近有特征性吸收峰。在此波长范围，近有特征性吸收峰。在此波长范围，PrPr的的ODOD280280与其浓度成正比。利用这个性与其浓度成正比。利用这个性质，可以对蛋白质进行定量测定质，可以对蛋白质进行定量测定。。（四）蛋白质的紫外吸收（四）蛋白质的紫外吸收蛋白质浓度蛋白质浓度mg/mlmg/ml＝＝1.45A1.45A280280-0.74A-0.74A262600反应试剂颜色反应基团有此反应试剂颜色反应基团有此反应的反应的PrPr及及AAAA双缩脲反应双缩脲反应NaOH,NaOH,稀稀CuSOCuSO44紫或粉紫或粉22个...
