结核病实验室检测结核病实验室检测新诊断技术介绍新诊断技术介绍省结核病参比实验室杨丹丹省结核病参比实验室杨丹丹发光二极管荧光显微镜(发光二极管荧光显微镜(LEDLED)方法)方法液基夹层杯技术液基夹层杯技术线性探针耐多药检测技术(线性探针耐多药检测技术(HAINHAIN))基因芯片耐多药检测技术(基因芯片耐多药检测技术(GENECHIPGENECHIP))TBTB和利福平耐药快速分子鉴定(和利福平耐药快速分子鉴定(X-PertX-Pert))一、发光二极管荧光显微镜(一、发光二极管荧光显微镜(LEDLED))方法方法适用范围:痰涂片镜检适用范围:痰涂片镜检所需试剂所需试剂//仪器:仪器:LEDLED显微镜、显微镜、荧光荧光染色液染色液中盖项目:淮安市(淮阴区、楚州区)中盖项目:淮安市(淮阴区、楚州区)原理:原理:发光二极管荧光显微镜(发光二极管荧光显微镜(LEDLED))镜下视野镜下视野发光二极管荧光显微镜(发光二极管荧光显微镜(LEDLED))不需要加热玻片,步骤简单不需要加热玻片,步骤简单视野比普通的显微镜大大视野比普通的显微镜大大2-42-4倍倍•对数目少的不必使用镜油对数目少的不必使用镜油•节省人力时间,时间为普通的节省人力时间,时间为普通的1/41/4每天可检查至少每天可检查至少6060个个涂片涂片•可帮助早期诊断肺结核–即使菌浓度较低可帮助早期诊断肺结核–即使菌浓度较低•杆菌也有很高的灵敏度,杆菌也有很高的灵敏度,与与ZNZN相比阳性发现率平均增加相比阳性发现率平均增加110%0%不需要空调设施不需要空调设施不需要暗室不需要暗室诊断性能优于标准荧光显微镜诊断性能优于标准荧光显微镜寿命长(寿命长(~15-20,000~15-20,000小时)小时)荧光染色液有致癌作用,推荐自动染色机。荧光染色液有致癌作用,推荐自动染色机。涂片需避光低温保存。涂片需避光低温保存。需加强操作人员的培训和质量控制。需加强操作人员的培训和质量控制。•成本低廉,价格低于成本低廉,价格低于现有的光学显微镜。现有的光学显微镜。适合县、乡级基层实验室使用。适合县、乡级基层实验室使用。二、液基夹层杯技术二、液基夹层杯技术适用范围:痰涂片镜检适用范围:痰涂片镜检十一五国家重大科技专项:泰兴、江阴十一五国家重大科技专项:泰兴、江阴厂家:湖南天骑公司厂家:湖南天骑公司原理:集菌法原理:集菌法流程图流程图痰标本消化灭活基片的夹层杯痰标本消化灭活基片的夹层杯离心细菌附着在基片在夹层离心细菌附着在基片在夹层杯中直接染色取出基片于载杯中直接染色取出基片于载玻片上玻片上镜检自动阅片计算机报镜检自动阅片计算机报告系统。告系统。所需仪器设备:普通的抗酸染色液、所需仪器设备:普通的抗酸染色液、彭氏杯彭氏杯(专利)、(专利)、涂片机涂片机、、KP21KP21型快速型快速干片机干片机、抗酸杆菌、抗酸杆菌自动阅片自动阅片计算机报告系统计算机报告系统。。阳性检出率标本及性状液基法直涂法754份痰标本23.50%16.80%脓性痰47.50%40.90%非脓性痰13.50%4.66%即时痰20.48%15.06%夜间痰25.6%17.01%重大专项:泰兴、江阴地区部分实验结果比较重大专项:泰兴、江阴地区部分实验结果比较三、线性探针耐多药检测方法(三、线性探针耐多药检测方法(HAIHAINN))适用范围:适用范围:11、、TBTB的诊断的诊断22、一线抗结核药物耐药诊断、一线抗结核药物耐药诊断33、二线抗结核药物耐药的诊断、二线抗结核药物耐药的诊断44、目前,利福平(、目前,利福平(rpoBrpoB基因)、异烟肼(基因)、异烟肼(KatKat基因、基因、inhAinhA基因)耐药的诊断基因)耐药的诊断所需仪器设备:生安柜、超声振荡仪、所需仪器设备:生安柜、超声振荡仪、PCRPCR扩增扩增仪、可调温振荡仪仪、可调温振荡仪原理:基于分子生物学扩增技术。原理:基于分子生物学扩增技术。rpoBrpoB基因突变位点有:基因突变位点有:44个个KatKat基因、基因、inhAinhA基因突变位点有:基因突变位点有:22个、个、44个个正确流程正确流程杂交PCRDNA提取MIX制备痰液前处理操作步骤操作步骤一、痰标本处理一、痰标本处理去污染...