细胞形态学检查细胞形态学检查一、倒置显微镜观察细胞的形态一、倒置显微镜观察细胞的形态（一）一般的形态学观察：（一）一般的形态学观察：（二）用相差显微镜观察细胞的形态（二）用相差显微镜观察细胞的形态（三）荧光显微镜观察细胞的形态和结构（三）荧光显微镜观察细胞的形态和结构IdentificationofculturedadultratRGCsIdentificationofculturedadultratRGCs.Culturedcellswerec.Culturedcellswereco-labeledwithanti-Thy-1antibody(A),anti-NF-Lantibody(B),o-labeledwithanti-Thy-1antibody(A),anti-NF-Lantibody(B),andDAPI(C).(D)AdigitallymergedimagesimultaneouslyrepresandDAPI(C).(D)Adigitallymergedimagesimultaneouslyrepresentsallthreefluorescentlabels.(E)Thecorrespondingphase-centsallthreefluorescentlabels.(E)Thecorrespondingphase-contrastimage.ontrastimage.免疫荧光染色法免疫荧光染色法用于标记二抗体的荧光素：用于标记二抗体的荧光素：（（11）异硫氰酸荧光素（）异硫氰酸荧光素（FITCFITC））发射的荧光波长为发射的荧光波长为490490～～619619（绿色荧光）（绿色荧光）（（22）四乙基罗丹明：荧光波长为）四乙基罗丹明：荧光波长为540540～～666600（橙红色荧光）（橙红色荧光）（（33））DAPIDAPI或或Hoechst33258:Hoechst33258:染核，用紫染核，用紫外激发外激发免疫荧光的染色步骤免疫荧光的染色步骤11、用、用95%95%乙醇固定细胞乙醇固定细胞10-3010-30分或用冷丙酮固分或用冷丙酮固定定55～～1010分。分。22、用、用PBSPBS洗洗33次。次。33、用、用PBSPBS配制的配制的1‰Triton101‰Triton10分。用分。用PBSPBS洗洗33次次44、用、用2%2%～～5%BSA5%BSA封闭封闭22小时小时55、加入一抗过夜，、加入一抗过夜，PBSPBS洗洗33次次66、加入二抗、加入二抗11～～22小时，小时，PBSPBS洗洗33次次77、核复染，荧光显微镜观察。、核复染，荧光显微镜观察。正常细胞和组织的培养正常细胞和组织的培养一、一、上皮细胞培养上皮细胞培养((epithelialculturepithelialculturee))上皮细胞包括腺上皮是很多器官如肝、胰、上皮细胞包括腺上皮是很多器官如肝、胰、乳腺等的功能成分，又由于癌起源于上皮乳腺等的功能成分，又由于癌起源于上皮组织，故上皮细胞培养特别受到重视。但组织，故上皮细胞培养特别受到重视。但上皮细胞培养中常混杂有成纤维细胞，培上皮细胞培养中常混杂有成纤维细胞，培养时生长速度往往超过上皮细胞，并难以养时生长速度往往超过上皮细胞，并难以纯化，同时上皮细胞难以在体外长期生存，纯化，同时上皮细胞难以在体外长期生存，因此纯化和延长生存时间是培养关键。因此纯化和延长生存时间是培养关键。体内上皮细胞生长在胶原构成的基体内上皮细胞生长在胶原构成的基膜，因此培养在有胶原的底物上可膜，因此培养在有胶原的底物上可能利于生长，另外人或小鼠表皮细能利于生长，另外人或小鼠表皮细胞培养在以胞培养在以3T33T3细胞为饲养层（用细胞为饲养层（用射线照射后）时，细胞易生长并可射线照射后）时，细胞易生长并可发生一定程度的分化现象。降低发生一定程度的分化现象。降低PHPH、、CaCa2+2+含量和温度，向培养基中加入表含量和温度，向培养基中加入表皮生长因子，均有利于表皮细胞生皮生长因子，均有利于表皮细胞生长。长。表皮细胞培养表皮细胞培养11、取材：外科植皮或手术残余皮肤小块，早产、取材：外科植皮或手术残余皮肤小块，早产流产儿皮肤更好，取角化层薄者，切成流产儿皮肤更好，取角化层薄者，切成0.50.5－－11平方厘米小块。平方厘米小块。22、置、置0.02%EDTA0.02%EDTA中，室温，中，室温，55分钟。分钟。33、换入、换入0.25%0.25%胰蛋白酶中，胰蛋白酶中，4℃4℃过夜。过夜。44、分离：取出皮块，用血管钳或镊子将表皮与、分离：取出皮块，用血管钳或镊子将表皮与真皮层分开。真皮层分开。55、取出表皮，剪成更小的块后，置、取出表皮，剪成更小的块后，置0.25%0.25%胰酶胰酶中，中，37℃37℃，，30—6030—60分钟。分钟。66、反复吹打，制成悬液。、反...
