类风湿性关节炎成纤维样滑膜及其对FLS细胞侵袭能力的影响_刘楠楠VIP专享VIP免费

类风湿性关节炎成纤维样滑膜（FLS）细胞中DDR2相互作用分子的筛选鉴定及其对FLS细胞侵袭能力的影响刘楠楠1a，赵薇2，穆楠1b，田菲1a，薛晓畅1b，颜真1b，张伟1b1.第四军医大学a.基础部教学实验中心；b.药学院生物制药学教研室；陕西西安710032；2.宁夏医科大学生物化学与分子生物学系，宁夏银川750004［摘要］目的：在类风湿性关节炎（RA）成纤维样滑膜（FLS）细胞中筛选并鉴定盘状结构域受体2（DDR2）的相互作用蛋白，并研究其对FLS细胞侵袭能力的影响。方法：首先利用免疫沉淀结合SDS-PAGE分离鉴定DDR2互作蛋白波形蛋白，进而采用免疫沉淀和激光共聚焦实验，进一步验证波形蛋白是DDR2的相互作用蛋白，最后采用Transwell实验考察波形蛋白对RAFLS细胞侵袭能力的影响。结果：Ⅱ型胶原刺激引起RAFLS细胞中DDR2的磷酸化水平升高，DDR2被活化，活化前后共有8个DDR2相互作用蛋白发生变化，经质谱分析，其中变化最大的是波形蛋白和膜联蛋白A2；在HEK293T细胞中，免疫共沉淀结果显示FcDDR2与波形蛋白存在相互作用；激光共聚焦结果显示在RAFLS细胞中，DDR2和波形蛋白存在共定位；下调RAFLS细胞中波形蛋白的表达后，细胞的侵袭能力较对照组显著下降。结论：波形蛋白是DDR2的相互作用蛋白，Ⅱ型胶原可引起RAFLS细胞的DDR2磷酸化水平升高，并通过波形蛋白促进RAFLS细胞的侵袭。［关键词］类风湿性关节炎；盘状结构域受体2；波形蛋白；成纤维样滑膜细胞［中图分类号］R744.5［文献标识码］A［文章编号］1009-0002（2015）03-0305-06EffectofDDR2InteractionProteinVimentinintheInvasionofRheumatoidArthritisFibroblast-LikeSynovialCellsLIUNan-Nan1a,ZHAOWei2,MUNan1b,TIANFei1a,XUEXiao-Chang1b,YANZhen1b,ZHANGWei1b*1.a.CenterofTeachingandExperiments,SchoolofBasicMedicalScience;b.DepartmentofBiopharmaceutics,SchoolofPharmacy;FourthMilitaryMedicalUniversity,Xi'an710032;2.NingxiaMedicalUniversity,Yinchuan750004;China*Correspondingauthor,E-mail:zhangw90@fmmu.edu.cn［Abstract］Objective:Toscreenthediscoidindomainreceptor2（DDR2）interactionproteininrheumatoidarthritis（RA）fibroblast-likesynovial（FLS）cellandinvestigatetheinteractionproteinfunctiononinvasionofRAFLScells.Methods:Firstly,weusedimmunoprecipitationcombinedwithSDS-PAGEtoscreenDDR2interactionpro⁃tein.Secondly,Co-IPandconfocalmicroscopywereusedtofurtherconfirmtheproteinvimentin.Thirdly,tran⁃swellassaywasusedtoevaluatetheeffectofvimentinoninvasionofRAFLScells.Results:CollagenⅡcouldenhancethephosphorylationofDDR2inRAFLScells,andwefound8DDR2interactionproteinafterDDR2ac⁃tivation,vimentinhadbeenchosentodothefurtherstudy.Co-IPandconfocalmicroscopyresultsconfirmedtheinteractionbetweenDDR2andvimentininHEK293TandFLScells.Afterdown-regulateexpressionofvimentin,theinvasionofRAFLScellsreducedremarkably.Conclusion:VimentinistheinteractionproteinofDDR2,colla⁃genⅡcouldenhancethephosphorylationofDDR2inRAFLScells,andencouragetheinvasionofFLScellsthroughvimentin.［Keywords］rheumatoidarthritis;discoidindomainreceptor2;vimentin;fibroblast-likesynovialcell类风湿性关节炎（rheumatoidarthritis，RA）是一种以慢性、进行性、侵袭性关节炎为主要表现的全身性自身免疫疾病，致残率很高。其病理表现主要为关节滑液炎性渗出和滑膜增厚包裹软骨引起软骨及软骨下进行性损伤，进而发生关节功能障碍甚至致残[1]。RA关节骨损伤与滑膜细胞“类肿瘤样”增殖侵袭和分泌大量与骨及软骨破坏相关的蛋白酶类密切相关[2]。滑膜细胞的恶性增殖可影响软骨的营养吸收稿日期：2015-01-06基金项目：国家自然科学基金（81302560，81273279，81260460）；陕西省自然科学基金（2012K-03-05）作者简介：刘楠楠（1982-），女，硕士研究生通信作者：张伟，（E-mail）zhangw90@fmmu.edu.cndoi:10.3969/j.issn.1009-0002.2015.03.001研究报告生物技术通...