实验二细菌的涂片及染色1.目的要求2.染色剂及染色原理3.实验材料4.实验步骤5.思考题本次实验内容一、目的要求①学习细菌涂片的基本技术②掌握细菌的简单染色和革兰氏染色法二、微生物染色的基本原理借助物理和化学因素的作用而进行1、物理因素如：细胞及细胞物质对染料的毛细现象、渗透、吸附作用等。2、化学因素如：正负离子之间的相互吸引等染色剂，按其电离后所带电荷的性质分：1、酸性染料酸性复红、刚果红、伊红、藻红、苯胺黑2、碱性染料碱性复红、中性红、孔雀绿、番红、结晶紫、美兰、甲基紫等，细菌易被碱性染料染色3、中性染料：伊红、美兰等，Wright染料和Gimsa染料等（常用于细胞核染色）4、单纯染色：这类染料的化学亲和力低，大多是偶氮化合物，不溶于水，但溶于脂肪溶剂中，如苏丹类的染料。三、实验材料①菌种牙垢细菌；大肠杆菌24h培养液；枯草杆菌12h培养液②载玻片、接种环、镊子、酒精灯、染色液、火柴③显微镜、吸水纸、酒精乙醚溶剂四、实验步骤(一)细菌染色方法1．单染色法：用一种染色液染菌体后，就可以观察微生物的大小、形状、和细胞排列状况，但不能鉴别微生物及它的特殊构造2．复染色法：用两种或两种以上染色液进行，常用：革兰氏染色法、抗酸染色法、芽孢染色法、鞭毛染色法、细胞染色法等染色技术：涂片——干燥——固定——染色——媒染——脱色——复染——水洗——干燥——镜检四、实验步骤(二)牙垢细菌单染色法①菌种：牙垢细菌②涂片③干燥：自然气干或酒精灯高处微微加热④固定⑤染色：在整个涂面上滴加石碳酸复红，染色1min⑥水洗：倾去染液，用自来水细流冲洗至流下水中无染料颜色为止⑦干燥：空气中自然干燥⑧镜检：在油镜下观察牙垢中的各种细菌形态并绘图示范照片简单染色视频四、实验步骤(三)革兰氏染色法革兰氏染色是Gram发明的一种细菌鉴别染色法，通过染色，可将细菌分为两大类：一类被染成紫色，称为革兰氏阳性细菌，另一类被染成红色，称为革兰氏阴性细菌。这种染色的结果主要与细菌的细胞壁结构和化学组成有关。步骤①涂片②初染：在做好的涂面上滴加草酸铵结晶紫染液，染1min，倾去染液，流水冲洗至无紫色媒染：先用新配的碘液冲去残水，而后用其覆盖涂面1min，后水洗③脱色：除去残水后，滴加95%酒精进行脱色约30sec，后立即用流水冲洗④复染：滴加番红染色液，染1min，水洗后用吸水纸吸干⑤镜检：观察染色结果并绘图革兰氏染色视频思考题1.要得到正确的革兰氏染色结果必须注意哪些操作？注意事项革兰氏染色成败与否与许多因素有关菌龄涂片厚薄脱色时间（最为关键）
