第二讲微生物的培养与应用考情一微生物的实验室培养1．(·浙江高考)幽门螺杆菌(Hp)感染是急慢性胃炎和消化性溃疡的主要致病因素。在患者体内采集样本并制成菌液后，进行分离培养。实验基本步骤如下：→→X→→请回答：(1)在配制培养基时，要加入尿素和酚红指示剂，这是因为Hp含有①________，它能以尿素作为氮源；若有Hp，则菌落周围会出现②________色环带。(2)下列对尿素溶液进行灭菌的最适方法是③________灭菌。A．高压蒸汽B．紫外灯照射C．70%酒精浸泡D．过滤(3)步骤X表示④________。在无菌条件下操作时，先将菌液稀释，然后将菌液⑤________到培养基平面上。菌液稀释的目的是为了获得⑥________菌落。(4)在培养时，需将培养皿倒置并放在⑦________中。若不倒置培养，将导致⑧________。(5)临床上用14C呼气试验检测人体是否感染Hp，其基本原理是Hp能将14C标记的⑨________分解为NH3和14CO2。解析此题考查微生物的分离与培养知识。(1)幽门螺杆菌(Hp)含有脲酶，能以尿素为氮源，在加入尿素和酚红指示剂的培养基中培养Hp，由于尿素经脲酶的降解可产生碱性的NH3，NH3能使培养基中的酚红由红黄色变为红色，故菌落周围会出现红色环带。(2)由于尿素加热会分解，对尿素溶液进行灭菌最好用G6玻璃砂漏斗过滤。(3)微生物的分离和培养步骤是：配制培养基→灭菌、倒平板→接种→培养。为获得单菌落，接种操作前应先将菌液稀释，然后将菌液涂布到培养基平面上即可。(4)微生物培养时需将培养皿倒置并放在恒温培养箱中，若不倒置培养，则无法形成单菌落。(5)幽门螺杆菌能将14C标记的尿素分解为NH3和14CO2，故临床上常用14C呼气试验检测人体内幽门螺杆菌的存在。答案(1)脲酶红(2)D(3)接种涂布单(4)恒温培养箱无法形成单菌落(5)尿素考情二分解尿素细菌的分离和计数2．分离土壤中分解尿素的细菌，对培养基的要求是()①加尿素②不加尿素③加琼脂糖④不加琼脂糖⑤加葡萄糖⑥不加葡萄糖⑦加硝酸盐⑧不加硝酸盐A．①③⑤⑦B．②④⑥⑧C．①③⑤⑧D．①④⑥⑦C[分离土壤中分解尿素的细菌，培养基中要有尿素、琼脂糖、葡萄糖，尿素给分解尿素的细菌提供氮源，不加硝酸盐。]3．自然界中的微生物往往是混杂生长的。人们在研究微生物时一般要将它们分离提纯，然后进行数量的测定。下面是对大肠杆菌进行数量测定的实验，请回答有关问题。实验步骤：(1)制备稀释倍数为102、103、104、105、106的系列稀释液。(2)为了得到更加准确的结果，你选用________法接种样品。(3)适宜温度下培养。结果分析：(1)测定大肠杆菌数目时，在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下几种统计结果，正确可信的是______________________________，其理由是______________________________________________________________。A．一个平板，统计的菌落数是230B．两个平板，统计的菌落数是220和260，取平均值240C．三个平板，统计的菌落数分别是210、50和520，取平均值260D．四个平板，统计的菌落数分别是210、300、240和250，取平均值250(2)一同学在稀释倍数为105的培养基中测得平板上菌落数的平均值为234，那么每毫升样品中的菌落数是______________(涂布平板时所用稀释液的体积为0．1mL)。(3)用这种方法测定的大肠杆菌密度，实际活菌数量要比测得的数量________，因为__________________________________________。解析本题考查微生物的计数方法，可从两种接种方法的优缺点和统计菌落数目时应注意的问题入手解答该题。为了得到更加准确的结果，应用稀释涂布平板法接种样品。(1)选取多个菌落数相差不大的平板计数，取其平均值。(2)234÷0．1×105＝2．34×108。(3)因为菌落可能由两个或多个细菌连在一起生长而成，所以实际活菌数量要比测得的数量多。答案实验步骤：(2)稀释涂布平板结果分析：(1)D在设计实验时，一定要涂布至少三个平板作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性；在分析实验结果时，要考虑所设置的重复组的结果是否相当(2)2．34×108(3)多当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的是一个菌落考情三分解纤维素的微生物的分离4．(·北京西城模拟)组氨酸缺陷型沙门氏菌是由野生菌种突变形成的，自身不能合成组氨酸...
