半抗原_载体蛋白偶联物的三种电泳鉴定方法VIP免费

中国农业科学2010,43(3):565-570ScientiaAgriculturaSinicadoi:10.3864/j.issn.0578-1752.2010.03.017收稿日期：2008-12-15；接受日期：2009-11-18基金项目：国家自然科学基金项目（20877029，30700663）、广东科技计划（Zgzhzd0808，2009B040500002）、国家“十一五”科技支撑计划项目（2006BAD27B02-05）作者简介：雷红涛，副教授，博士。Tel：020-85288279；E-mail：immunoassay@tom.com。通信作者孙远明，教授，博士。Tel：020-85288279；Email：ymsun@scau.edu.cn半抗原-载体蛋白偶联物的三种电泳鉴定方法雷红涛1，庞杰1，2，贺丽苹3，杨金易1，孙远明1,秦毅兰1，梁明标1（1华南农业大学食品学院/广东省食品质量安全重点实验室，广州510642；2福建农林大学食品科技学院，福州350002；3华南农业大学分析测试中心，广州510642）摘要：【目的】建立一种简单方便的半抗原-载体蛋白偶联物电泳鉴定方法。【方法】选用SDS-PAGE、非变性琼脂糖凝胶电泳、高效毛细管区带电泳3种方法对载体蛋白、偶联剂变性的载体蛋白、半抗原-载体蛋白进行比较鉴定，同时与光谱法结果比较。【结果】对分子量差异较小的载体蛋白和半抗原-载体蛋白偶联物，SDS-PAGE不能有效分辨；但偶联前后载体电荷有变化时，非变性琼脂糖凝胶电泳却能有效分辨游离的载体蛋白和半抗原-载体蛋白偶联物，相对SDS-PAGE表现出更高的分辨灵敏度；毛细管区带电泳能高效分辨载体和半抗原-载体蛋白偶联物，结果直观，但需较贵重的专用仪器。琼脂糖电泳和毛细管电泳法与可见-紫外光谱法鉴定结果一致。【结论】3种电泳方法各有优缺点，非变性凝胶电泳简便、廉价、有效，较适合普通实验室使用。关键词：半抗原-载体蛋白偶联物；SDS-PAGE；非变性琼脂糖凝胶电泳；毛细管区带电泳IdentificationofHapten-CarrierProteinConjugatebyThreeElectrophoresisMethodsLEIHong-tao1,PANGJie1,2,HELi-ping3,YANGJin-yi1,SUNYuan-ming1,QINYi-lan1,LIANGMing-biao1（1GuangdongKeyLaboratoryofFoodQualityandSafety/CollegeofFoodScience,SouthChinaAgriculturalUniversity,Guangzhou510642;2CollegeofFoodScienceandTechnology,FujianAgricultureandForestryUniversity,Fuzhou350002;3InstrumentalAnalysisandResearchCenterofSouthChinaAgriculturalUniversity,Guangzhou510642）Abstract:【Objective】Toestablishasimpleelectrophoresischaracterizationmethodforhapten-carrierproteinbioconjugate.【Method】SDS-PAGE,nondenaturingagarosegelelectrophoresisandhighperformancecapillaryelectrophoresiswereemployedandcomparedwithspectrummethod.【Result】TheresultshowedthatSDS-PAGEwasnotasensitivecandidatemethodtodifferentiatecarrierproteinfrombioconjugatewhenbothproteinshavelessmolecularweightdifference,butnondenaturinggelelectrophoresiswasabetteralternative,whichcoulddiscriminatethefreecarrierproteinandbioconjugateproteinwithdifferentnetchargenumbers.Highperformancecapillaryzoneelectrophoresiswasanotherpowerfulapproachforhapten-carrierproteinbioconjugatecharacterization.Theinformationobtainedfromthreeelectrophoresiswasinaccordancewiththeonefromultraviolet-visiblespectrumscanning.【Conclusion】Threeelectrophoresismethodshaddifferentadvantagesanddisadvantages,cost-savingandsimplenondenaturingelectrophoresisseemedtohavemoreavailabilityinmostlaboratories.Keywords:hapten-carrierproteinbioconjugate;SDS-PAGE;nondenaturingagarosegelelectrophoresis;capillaryzoneelectrophoresis0引言【研究意义】半抗原（hapten）为小分子物质，分子量一般不超过1000D，通常需要与大分子载体蛋白共价偶联形成“半抗原-载体蛋白”偶联物（hapten-proteinbioconjugate）才具有免疫原性[1]。这种偶联物也称全抗原或人工抗原。半抗原-载体蛋白偶合物是否偶联成功决定着动物免疫后能否产生目标抗体，因此566中国农业科学43卷半抗原-载体蛋白偶联物的鉴定对与半抗原类物质抗体制备非常关...