亲和层析的应用VIP免费

亲和层析的应用亲和层析的应用亲和层析亲和层析亲和层析亲和层析（（affinitychromatographyaffinitychromatography））是利是利用待分离物质和它的特异性配体间具有特用待分离物质和它的特异性配体间具有特异的亲和力，从而达到分离目的的一类特异的亲和力，从而达到分离目的的一类特殊层析技术。殊层析技术。亲和层析法具有多方面的应用。亲和层析法具有多方面的应用。核酸的纯化核酸的纯化因为因为DNADNA与与RNARNA之间具有专一性的亲和力，之间具有专一性的亲和力，所以亲和层析可应用于核酸的研究，例如从所以亲和层析可应用于核酸的研究，例如从大肠杆菌的大肠杆菌的RNARNA混合物中分离出专一于噬菌混合物中分离出专一于噬菌体体T4T4的的RNARNA，可将，可将T4T4的的DNADNA以共价键以共价键结方式接于结方式接于cellulosecellulose材质的管柱中，再将所材质的管柱中，再将所要的要的RNARNA分离出。分离出。此外，根据核酸与蛋白质之间交互作用的原此外，根据核酸与蛋白质之间交互作用的原理，可以将单股理，可以将单股DNADNA接在接在SepharoseSepharose上，上，纯化纯化DNADNA聚合酶或聚合酶或RNARNA聚合酶。聚合酶。激素激素受体受体的的纯化纯化激素受体是细胞膜上与特定激素结合的成激素受体是细胞膜上与特定激素结合的成份，激素和受体的作用具有特异性，目前份，激素和受体的作用具有特异性，目前用亲和层析法已经能够将激素与用亲和层析法已经能够将激素与sephrosesephrose的组合，纯化胰岛素、正甲状腺素的受体。的组合，纯化胰岛素、正甲状腺素的受体。抗体与抗原的纯化抗体与抗原的纯化抗体与抗原结合具有高度专一抗体与抗原结合具有高度专一性，性，SepharoseSepharose是这一类亲和层析较佳是这一类亲和层析较佳的载体，由于抗原的载体，由于抗原--抗体复合物的解离常抗体复合物的解离常数很低，因此抗原在固定化抗体上被吸附数很低，因此抗原在固定化抗体上被吸附后，要尽快将它洗出，冲洗液的条件通常后，要尽快将它洗出，冲洗液的条件通常是控制是控制pHpH值至值至33以下，成份为醋酸、盐以下，成份为醋酸、盐酸、酸、Tris-HClTris-HCl缓冲液、缓冲液、20%20%甲酸或甲酸或1mol/L1mol/L丙酸，也有使用尿素这一类的蛋丙酸，也有使用尿素这一类的蛋白质变性剂作为洗出用的溶液。白质变性剂作为洗出用的溶液。酶和酶的抑制剂纯化酶和酶的抑制剂纯化使用亲和层析法纯化酶，可以得到相当好的使用亲和层析法纯化酶，可以得到相当好的效果。例如，要分离猪和牛的胰蛋白酶，可效果。例如，要分离猪和牛的胰蛋白酶，可以连接鸡卵黏蛋白（胰蛋白酶的抑制剂）与以连接鸡卵黏蛋白（胰蛋白酶的抑制剂）与Sepharose4BSepharose4B当作层析柱材质，用它纯化出当作层析柱材质，用它纯化出来的胰蛋白酶相当于来的胰蛋白酶相当于55次再结晶的纯度。次再结晶的纯度。除了使用抑制剂当配体，也可以反过来用酶除了使用抑制剂当配体，也可以反过来用酶作为配体来纯化抑制剂，例如，将胰蛋白酶作为配体来纯化抑制剂，例如，将胰蛋白酶接到接到SepharoseSepharose上，能有效分离纯化大肠杆上，能有效分离纯化大肠杆菌中的胰蛋白抑制剂菌中的胰蛋白抑制剂EcotinEcotin。。Chitin几丁质CHOM鸡蛋粘多糖蛋白Trypsin胰岛素亲和层析的应用亲和层析的应用亲和层析法分离胆固醇氧化酶亲和层析法分离胆固醇氧化酶季文明季文明,,陈毅力等陈毅力等江南大学生物工程学院江南大学生物工程学院亲和层析法分离胆固醇氧化酶亲和层析法分离胆固醇氧化酶胆固醇氧化酶是一种多功能酶。目前胆固醇氧化酶是一种多功能酶。目前,,医院医院应用胆固醇氧化酶检测血清胆固醇含量。应用胆固醇氧化酶检测血清胆固醇含量。胆固醇氧化酶可以降低食品中的胆固醇含胆固醇氧化酶可以降低食品中的胆固醇含量；能有效抑制鳞翅目昆虫的生长繁殖量；能有效抑制鳞翅目昆虫的生长繁殖,,是是一种生物杀虫剂；胆固醇的氧化产物胆甾一种生物杀虫剂；胆固醇的氧化产物胆甾--4-4-烯烯-3--3-酮还具有抗肥胖、治疗肝病等药效。酮还具有抗肥胖、治疗肝病等药效。亲和层析法分离胆固醇氧化酶亲和层析法分离胆固醇氧化...