医学微生物实验ExperimentofMedicalMicrobiology•巩固基础理论、基本概念•学习基本操作•树立无菌概念微生物实验目的实验室规则：1.必须穿白大衣；2.尽量保持安静；3.自己的实验器材(试管、平皿等)注明菌种、日期、组、姓名；4.除示教片以外，沾染过传染物的实验器材必须放入消毒缸；5.注意安全；不要随意调动实验室仪器。6.实验结束后，泡手、洗手。细菌的培养法细菌生长繁殖必要条件营养物质：水、碳源、氮源、无机盐、生长因子环境条件：酸碱度、渗透压、温度和必要的气体培养基的定义微生物生长繁殖所需要的营养物质混合而成的营养基质，一般pH为7.2~7.6，高压灭菌后使用。培养基分类按其营养组成和用途不同基础培养基：营养培养基：选择培养基：鉴别培养基：厌氧培养基：按物理状态不同液体培养基:用于大量繁殖细菌固体培养基:液体培养基中加入1.5%~2.5%琼脂粉，用于细菌分离和纯化半固体培养基:琼脂粉含量在0.3%~0.5%，用于观察细菌的动力和短期保存菌种细菌在培养基中的生长情况液体培养基：表面生长均匀混浊生长沉淀生长固体培养基：菌落，菌苔分离培养：将标本或培养物划线接种在固体培养基表面，因划线的分散作用，使许多原混杂的细菌在固体培养基表面分散开，称分离培养。菌落：单个细菌生长后形成的肉眼可见的细菌集团叫菌落。纯培养：挑取一个菌落接种到另一培养基中，生长出来的细菌为纯种，称为纯培养。半固体培养基：无动力有动力细菌培养的应用在医学中的应用•感染性疾病的病原学诊断•细菌学的研究•生物制品的制备在工农业生产中的应用在基因工程中的应用实验三细菌的培养培养基菌种方法普通琼脂平板普通琼脂平板大肠、金葡混和菌液大肠、金葡混和菌液平板划线肉汤培养基肉汤培养基大肠、枯草杆菌大肠、枯草杆菌液体接种液体接种半固体培养基半固体培养基变形、痢疾杆菌变形、痢疾杆菌穿刺接种穿刺接种目的：学习掌握细菌分离和培养的各种基本技术斜面培养基斜面培养基大肠杆菌大肠杆菌斜面划线斜面划线2人/组four-areastreakplatetechniqueIVIII1/5I1/10Rotate90FlameloopRotate90Rotate90III1/4Flameloop液体接种斜面接种细菌的形态和结构细菌的形态和结构细菌基本形态：球菌杆菌螺形菌细菌基本结构：细胞壁、细胞膜、细胞质、核质♦细菌特殊结构：SporeCapsuleFlagellaPilus？？？细菌的形态和结构：观察示教片：9张观察内容示教片重点观察细菌基本形态球菌葡萄球菌链球菌肺炎链球菌形状、大小、排列方式杆菌大肠杆菌炭疽杆菌弧菌霍乱弧菌细菌特殊结构荚膜肺炎球菌荚膜大小与菌体的关系芽胞破伤风梭菌芽胞在菌体上的位置、大小鞭毛变形杆菌鞭毛的形态、数量、位置真菌形态的观察真菌形态的观察真菌的菌落形态1.新生隐球菌：酵母型菌落；类似细菌菌落；2.白假丝酵母菌：类酵母菌落(酵母样菌落)；3.霉菌：丝状菌落；多细胞真菌的菌落形式。真菌镜下形态观察1.霉菌小培养：菌丝，孢子2.新生隐球菌墨汁涂片：厚荚膜、芽生孢子3.白假丝酵母菌：厚膜孢子、假菌丝革兰染色法菌种：两个单菌落E、S试剂：生理盐水、结晶紫、碘液、95%乙醇、沙黄材料：酒精灯、接种环、玻片、步骤①涂片②自然干燥③固定④染色初染：结晶紫，1~2滴，时间1分钟，用水冲洗。媒染：碘液，1~2滴，时间1分钟，用水冲洗。脱色：95％乙醇数滴，时间半分钟（30秒），用水冲洗。复染：沙黄，1~2滴，1分钟，用水冲洗。⑤滤纸吸干，油镜观察。抗酸染色法标本：结核病人痰涂片，枯草涂片试剂：石炭酸复红、3%盐酸酒精、碱性美兰步骤①固定②染色初染：石炭酸复红数滴，时间8~10分钟，用水冲洗。脱色：3%盐酸酒精数滴，时间0.5~1分钟（30秒），用水冲洗。复染：碱性美兰，1~2滴，1分钟，用水冲洗。③滤纸吸干，油镜观察。
