1EUROIMMUN抗核抗体（ANA）实验室检测策略2EUROIMMUN抗核抗体检测策略患者有疑似自免疾病?ANA全抗原检测(IIFT,HEp-2cells)-对患者进行跟踪监测-增加检测项目（ELISA，Blot）以提高灵敏度，如dsDNA、SSA、Jo-1等。-进行特异性抗原检测（ELISA,Blot）确定靶抗原及疾病特性3EUROIMMUN美国风湿学会(ACR)立场声明•HEp-2细胞包含大约100至150种自身抗原•其它初筛方法仅具有少量自身抗原(8-10)…大约35%SLE患者和IFT-ANA阳性患者在其它初筛实验中为阴性结果…建议：•IFT-ANA仍然为ANA检测的金标准!•医院或商业诊断所应用其它ANA检测方法时，必须要求为临床大夫提供足够的数据证明其它ANA检测方法与IFT比较具有同样或更高的敏感度和特异性.•实验室在ANA报告当中必须注明ANA检测方法.EUROIMMUN4EUROIMMUNANA筛查:间接免疫荧光法(IFT)→抗原谱完整(细胞核、细胞浆)→检测ANA的金标准，具有很高的敏感性和特异性→基质组合:HEp-2细胞+灵长类肝5EUROIMMUNHEp-2细胞+灵长类肝-确认IIF的荧光模型，如-肌动蛋白-核糖体P蛋白-区分IIF的荧光模型，如：-着丝点↔核点-SS-A/-B↔Sm/RNP↔Ku-还可获得其它结果，如：-ANCA-肌内膜/谷氨酰胺转移酶6EUROIMMUN确认IIF的荧光模型HEp-2细胞灵长类肝肌动蛋白核糖体P蛋白7EUROIMMUN区分IIF的荧光模型HEp-2细胞灵长类肝着丝点核点8EUROIMMUN区分IIF的荧光模型HEp-2细胞灵长类肝着丝点和核点9EUROIMMUN区分IIF的荧光模型HEp-2细胞相似的颗粒型–很难区分Sm/RNPSS-A/SS-BKu10EUROIMMUN区分IIF的荧光模型灵长类肝区分荧光模型–容易区分Sm/RNPSS-A/SS-BKu11EUROIMMUN区分IIF的荧光模型Sm/RNPSS-A/SS-BKu灵长类肝HEp-2细胞12EUROIMMUN灵长类肝:结果肌内膜pANCAEUROIMMUN13EUROIMMUNANA检测：分型实验�ELISA:-单特异ELISA：适合大批量标本的检测-ENA谱：各种高纯抗原的组合�欧蒙斑点法/欧蒙印迹法:-ENA谱：各种高纯抗原的组合�免疫印迹法:-适合用于区分一些特殊抗体(如RNP：70K,A,C)-适合检测针对目前还不能纯化的抗原的抗体(如Ku)14EUROIMMUNELISA:ENA谱15EUROIMMUN欧蒙斑点法:ENA谱16EUROIMMUN欧蒙印迹法:ENA谱17EUROIMMUN免疫印迹法：HEp-2细胞抗原提取物18EUROIMMUN欧蒙推荐的ANA稀释方案19EUROIMMUN欧蒙ANA—IIF稀释方案欧蒙ANA间接免疫荧光法检测系统的起始稀释度为1:100。即该检测系统的正常参考范围为1:100。梯度稀释时的稀释因子为1:3.2。推荐每个标本至少平行做两个稀释度：1:100和1:1000。由于不同厂家ANA检测系统的起始稀释度和稀释因子不同，因而不同厂家的ANA滴度结果不能直接进行比较。20EUROIMMUN欧蒙实验室ANAIIF的研究结果起始稀释度1:100时：正常人血清中ANA95％以上为阴性，ANA阳性的抗体滴度明显低于风湿性疾病患者。多数风湿性疾病患者血清中ANA滴度大于1:100，但大于1:32000以上的抗体滴度也较少见。例数抗体滴度1:100风湿性疾病患者15000份正常人1:10000EUROIMMUN21EUROIMMUN欧蒙实验室推荐的ANA稀释方案起始稀释度：1:1001:1,000抗体滴度：1:1001:1,0001:3201:3,2001:10,000报告结果抗体浓度范围：（＋）＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋EUROIMMUN22EUROIMMUN原因1:高滴度抗体在低稀释倍数时可能被非特异性反应遮盖抗Yo抗体(猴小脑)1:101:100抗表皮基底膜抗体(喉舌)1:101:100AMA(鼠肾)1:1001:1000pANCA(人中性粒细胞)1:11:10推荐一个标本平行作两个稀释度1:100和1:1000(1)23EUROIMMUN原因2：在低稀释倍数时多种自身抗体可能相互掩盖1:10001:1000ANA核均质型和着丝点型1:1001:100ANA核均质型和核仁型推荐一个标本平行作两个稀释度1:100和1:1000(2)24EUROIMMUN推荐一个标本平行作两个稀释度1:100和1:1000(3)两个滴度平行检测：1:100和1:1,000，通过一次实验，就可估计抗体的滴度1:1,000ANA均质型（滴度1:10,000）1:1001:1,000ANA均质型（滴度1:1,000）1:10025EUROIMMUN推荐一个标本平行作两个稀释度1:100和1:1000(4)极强的阳性，高度提示存在相关疾病。强阳性，高度提示存在相关疾病中等阳性，提示可能存在相关疾病弱阳性，提示可能存在相关疾病。可疑阳性。临床意义＋＋＋＋1:10000强＋强＋＋＋＋1:3200＋强＋＋＋1:1000弱＋强＋＋1:320—强＋（...
