α-α-淀粉酶菌株摇瓶发酵初筛及淀粉酶菌株摇瓶发酵初筛及酶活力测定酶活力测定目的要求目的要求了解利用微生物摇瓶发酵初筛的目的了解利用微生物摇瓶发酵初筛的目的。。了解发酵用培养基的配制要求。了解发酵用培养基的配制要求。掌握掌握碘比色法（部颁标准）测定碘比色法（部颁标准）测定α-α-淀粉淀粉酶活力的原理和方法步骤酶活力的原理和方法步骤。。发酵培养基发酵培养基（（100mL100mL装于装于500mL500mL三角瓶）三角瓶）可溶性淀粉可溶性淀粉8g8g；；豆粕粉豆粕粉4g4g；；NaNa22HPOHPO44.12H.12H22O0.8gO0.8g；；（（NHNH44））22SOSO440.4g0.4g；；CaClCaCl220.2g0.2gNHNH44Cl0.15gCl0.15g；；CaCOCaCO330.15g0.15g水水100mL100mL121.3℃121.3℃灭菌灭菌2020分钟分钟发酵培养基配制说明发酵培养基配制说明三角瓶规格要统一。三角瓶规格要统一。先将不溶解的可溶性淀粉、豆粕粉、先将不溶解的可溶性淀粉、豆粕粉、CaCCaCOO33分别称于分别称于500mL500mL三角瓶。三角瓶。将无机盐称量后先溶解于水中，调节将无机盐称量后先溶解于水中，调节pHpH为为7.0~7.57.0~7.5，再用量筒量取，再用量筒量取100mL100mL加于加于三角瓶中，轻摇混匀。三角瓶中，轻摇混匀。121.3℃121.3℃灭菌灭菌2020分钟分钟灭完菌后取出，要马上轻摇混匀（？）。灭完菌后取出，要马上轻摇混匀（？）。种子培养基（下周使用）种子培养基（下周使用）可溶性淀粉可溶性淀粉3g3g；；NaNa22HPOHPO44.12H.12H22O0.4gO0.4g；；（（NHNH44））22SOSO440.2g0.2g；；CaClCaCl220.2g0.2gNHNH44Cl0.15gCl0.15g；；4%4%豆粕粉浸出液豆粕粉浸出液100mL100mL煮沸使淀粉溶解后，取煮沸使淀粉溶解后，取50mL50mL分装于分装于250250mLmL三角瓶（三角瓶（22瓶）包扎；取瓶）包扎；取5mL5mL分装于分装于18×180mm18×180mm试管中（试管中（55支），加塞包扎。支），加塞包扎。121.3℃121.3℃灭菌灭菌2020分钟分钟其它器材其它器材1mL1mL无菌吸管无菌吸管1010支支2mL2mL无菌吸管无菌吸管55支支相关碘液的配制相关碘液的配制碘原液：碘原液：称取碘称取碘11g11g，碘化钾，碘化钾22g22g，置，置于小烧杯中，加于小烧杯中，加10ml10ml蒸馏水使之溶解，蒸馏水使之溶解，然后转入容量瓶中。再加少量的蒸馏水洗然后转入容量瓶中。再加少量的蒸馏水洗涤烧杯数次，洗涤液均转入容量瓶中，最涤烧杯数次，洗涤液均转入容量瓶中，最后定容至后定容至500ml500ml。摇均后放于棕色瓶中。摇均后放于棕色瓶中备用。备用。比色稀碘液：比色稀碘液：取碘原液取碘原液2ml2ml，加碘化钾，加碘化钾220g0g，再用蒸馏水定容至，再用蒸馏水定容至500ml500ml。摇均后。摇均后放于棕色瓶中备用放于棕色瓶中备用标准比色碘液：标准比色碘液：取碘原液取碘原液1515毫升，加碘毫升，加碘化钾化钾88克，用蒸馏水定容至克，用蒸馏水定容至500500毫升。毫升。储藏于棕色瓶内。储藏于棕色瓶内。pH6.0pH6.0磷酸氢二钠磷酸氢二钠--柠檬酸缓冲柠檬酸缓冲液：液：pH6.0pH6.0磷酸氢二钠磷酸氢二钠--柠檬酸缓冲液：柠檬酸缓冲液：称取称取磷酸二氢钠（磷酸二氢钠（NaNa22HPOHPO44.12H.12H22OO））45.3g45.3g，，柠檬酸（柠檬酸（CC66HH88OO77.H.H22OO））7.74g7.74g，先在烧，先在烧杯中使之溶解，然后转入容量瓶中定容至杯中使之溶解，然后转入容量瓶中定容至11000ml000ml。。2%2%可溶淀粉溶液及标准糊精溶液配制可溶淀粉溶液及标准糊精溶液配制2%2%可溶淀粉溶液：可溶淀粉溶液：称取称取20g20g可溶淀粉，可溶淀粉，放入小烧杯中，加少量蒸馏水做成悬浮液。放入小烧杯中，加少量蒸馏水做成悬浮液。然后在搅拌下注入沸腾的然后在搅拌下注入沸腾的700mL700mL蒸馏水中，蒸馏水中，继续煮沸一分钟（透明），冷却后用继续煮沸一分钟（透明），冷却后用pH6pH6磷酸氢二钠磷酸氢二钠--柠檬酸缓冲液定容至柠檬酸缓冲液定容至1000ml1000ml。。标准糊精溶液：标准糊精溶液：取取0.060.06克化学纯糊精悬于克化学纯糊精悬于少量水中调匀，然后倾入少量水中调匀，然后倾入9090毫升正在煮沸毫升正在煮沸腾的蒸馏水中，冷却后定容至腾的蒸馏水中，冷却后定容至100100毫升，毫升，滴加...
