血清总胆汁酸循环酶法测定法1.实验原理胆汁酸会被3-羟甾醇脱氢(3-HSD)以及-硫代烟酰胺脲嘌呤二核苷酸氧化型(Thio-NAD)特异性地氧化,生成3-酮类固醇以及-硫代烟酰胺脲嘌呤二核苷酸还原型(Thio-NADH)。此外生成的3-酮类固醇在3-羟甾醇脱氢(3-HSD)及-硫代烟酰胺脲嘌呤二核苷酸还原型(Thio-NADH)存在下,生成胆汁酸及-硫代烟酰胺脲嘌呤二核苷酸氧化型(Thio-NAD)。如上所述,依据循环酶而放大微量的胆汁酸量,测定单位时间内生成的-硫代烟酰胺脲嘌呤二核苷酸还原型(Thio-NADH)在405nm处的吸光度变化,以求得胆汁酸的浓度。2.标本:2.1病人准备:标本以空腹血清为宜,餐后胆汁酸会升高,应注意采血时间。2.2类型:血清、肝素或EDTA处理的血浆。应使用新鲜标本。标本必须避光保存。3.标本存放4℃保存可稳定7天,-20℃保存可稳定3个月。4.标本运输常温条件下避光保存运输。5.标本拒收标准细菌污染的标本。6.实验材料6.1试剂南京波因特总胆汁酸测定试剂盒(试剂1:2×60ml试剂2:2×20ml)6.1.1试剂组成试剂1(R1):β-硫代烟酰胺脲嘌呤二核苷酸氧化型(Thio-NAD)2mmol/LTris缓冲液30mmol/L试剂2(R2):脲嘌呤二核苷酸氧化型(NAD)2mmol/L3a-羟甾醇脱氢酶(3a-HSD)5U/L6.1.2试剂准备:试剂为即用式。6.1.3试剂稳定性与贮存:试剂避光保存于2~8℃,若无污染,可稳定至失效期。试剂不可冰冻,试剂2必须避光保存。6.1.4变质指示:当试剂有看得见的微生物生长,有浊度,或者未开盖的液体有沉淀时,表明试剂已变质,不能继续使用。6.1.5注意事项:不可入口!避免接触皮肤及粘膜。应采取必要的预防措施使用试剂6.2校准品:使用南京波因特公司提供的TBA校准品对自动分析仪进行校准,具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。6.3质控品:具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。7.仪器:贝克曼AU680生化分析仪8.操作步骤:8.1项目基本参数:参见AU680生化分析仪项目测定参数.SOP文件8.2仪器操作步骤:参见AU680生化分析仪操作规程.SOP文件9.检验结果的判断与分析10.质量控制:在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析,以2S为质控警告限,3S为失控限,绘制质控图,判断是否在控。质控规则参见室内质控操作规程.SOP文件。11.计算方法:以南京波因特公司提供的TBA校准品校准仪器后,在病人结果可报告范围内,仪器直接报告可靠的检测结果,以μmol/L报告。12.参考值范围[2,3]:成年人:<10μmol/L参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验,每个实验室应建立自己的参考值。13.临床意义14.操作性能14.1线性范围:1.06~90μmol/L。14.2精密度:批内精密度n=20(μmol/L)s(μmol/L)CV(%)天间精密度n=20(μmol/L)s(μmol/L)CV(%)样品17.00.223.14样品17.20.324.44样品220.80.432.07样品222.40.622.77样品350.40.881.75样品352.41.011.9314.3方法学比较:本公司的试剂盒(y)与某商品化试剂盒(x),同时对79个样品进行TBA检测,将检测结果作方法学比较,其统计结果如下:y=0.999x+0.19μmol/L;r=0.999。14.4灵敏度:本试剂的检测限为1.06μmol/L。14.5病人结果可报告范围:1.06~90μmol/L。15.超出范围结果处理本法的检测范围为1.06~90μmol/L。当样品测定值超过上限时,应将样品用9g/L氯化钠溶液作1+1稀释,重新测定,结果乘以2。16.病危报警值的处理17.方法局限性17.1本法的检测范围为1.06~90μmol/L。当样品测定值超过上限时,应将样品用9g/L氯化钠溶液作1+1稀释,重新测定,结果乘以2。17.2干扰物质:当样品中抗坏血酸浓度≤100mg/L,胆红素≤50mg/L,血红蛋白≤5g/L,乳糜度≤3000度时没有观察到干扰。18.补救措施:当仪器发生故障时,迅速联系仪器厂家进行维修。19.参考文献1.JungK,BohmM.Enzyme,23:201(1978)2.HafkenscheidJCM,DijitCCM.ClinChem,25(1):55(1979)3.TietzNW.Fundamentalsofclinicalchemistry,W.B.SaundersCo.,p674(1982)4.TsunodaT,EtoT,FurukawaM,NakataT,KusanoT,LinY,TashiroK,WatabeS,TsuchiyaR.Clearandcolorlessfluidobservedduringpercutaneoustranshepaticgallbladderdrainage.GastroenterolJpn1990;25:619-24.5.Keller,h.:klinisch-chemischelabordiagnostikfurdiepraxis,2ndedition,georgthiemeverlag,stuttgart,1991:246.6.ScientificTablesGeigy,partialvolumebodyfluids.Basel:Ciba-Geigy1977;8:136-43.7.KruisW,PaumgartnerG.Bileaciddepletionsyndrome.DtArztebl1982;79:33-620.其他:仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集后按《检验科废物处置管理规定》执行。