袁舶刍第2o卷第10期2005年10月JApplClinPediatr．Vo1．20No．10October2005·小儿神经基础与I搐床·联合主办《实用儿科临床杂志》编辑部一一·论著·儿童脊髓性肌萎缩症的基因诊断梁国安，周柏林，余钟声(1．浙江省台州医院，浙江台州3l7000；2．浙江大学医学院附属儿童医院，杭州3l0003)[摘要]目的探讨儿童脊髓性肌萎缩症(SMA)的特异性基因诊断方法。方法应用聚合酶链反应一限制性片段长度多态性(PCR—RFLP)技术，对l9例临床诊断为SMA患儿及21名健康儿童的运动神经元存活(SMN)基因进行检测结果SMA患儿SMN基因的第7和第8号外显子均缺失，健康儿童SMN基因的第7和第8号外显子均未缺失结论检测SMN基因第7和第8号外显子缺失的方法町用于SMA的基因诊断，且PCR—RFLP技术对SMA的诊断具有较高的特异性和敏感性。实焉L科临床杂志2005,20(10}：1011—1012[关键词]脊髓性肌萎缩；运动神经元；基因[中图分类号]R729[文献标识码]A[文章编号]1003—515X(2005)10—1011—02GeneDiagnosisofSpinalMuscularAtrophyinChildrenLIANGGuo一Ⅱ，。．ZHOUJlin：．YUZhongsheng：(1、FaizhouHospitalofZhejiangProvince，Taizhou317000，China；2TheAffiliatedChildrensHospita1．MedicalCollegeofZhe—jiangUniversity，Hangzhou310003，China)Abstract：ObjectiveToestablishagenediagnosisassayforspinalmuscularatrophy(SMA)inchildren．MethodAnalysisofthesurvivalmot()rneuron(SMN)genein19SMApatientsandin21nomlalcontrolswereperforatedbyusingtx)lymera~chainreaction—fragmentlengthpolymorphisrn(I)(：R—RFLP)methcM．ResultDeletionofexon7and8inSMNtgenewerefoundinall19SMApatients，whilenosuchchangeswerefoundinnormalcontrols，ConclusionTheSMNtgeneexon7and8examinecanbeappliedtOSMAgenediagnosis．andtheP(1lR—RFLPmethodhavehigher~nsitivityandparticularitytOtheSMAdiagnosis．JApplClinPediatr．2005．20(10)：1011—1012Keywords：spinalmu~uIaratrophy；n~：)torneuron~,gene脊髓性肌萎缩症(spinalmu~ularatrophy，SMA)是一组常见的由于脊髓前角细胞变性导致的进行性肌无力、肌萎缩为特征的常染色体隐性遗传病。其发生率在活产婴儿中为l／万，在携带者中为1／50，居致死性常染色体隐性遗传病第2位，仅次于囊性纤维变⋯。1995年Lefdwre等【!在5ql3．1发现了运动神经元存活(survivalmotorneuron，SMN)基因，SMN基因在一条染色体上具有2个拷贝，在端粒侧称SMNt，位于中心粒侧称SMNc。我们应用tK'R法，结合限制性片段长度多态性(RFL』))技术，对临床诊断l9例SMA患儿作SMN基因缺失的研究。资料与方法一、一般资料SMA患儿19例均来自2002年8月～2004年1月浙江大学医学院附属儿童医院神经科门诊或住院病例。男12例，女7例，发病年龄14d～7岁均符合临床诊断及分型标准l3J，经肌电图及肌肉活检确诊。其中I型14例，Ⅱ型2例，ⅡI型3例。正常X'-tN组21名，男l1名，女10名，年龄2个月～12岁。二、方法1．DNA的提取：取抗凝静脉血0．2n，加0．87％氯化氨ln，37℃水浴15min，2000r／rain离心10min，弃上清液。再重复2次。沉淀即为白细胞。用蛋白质沉淀法提取[收稿日期]2005—07—25[作者简介]梁国安，男，主治医师，硕士学位，研究方向为神经系统疾病。I)NA，紫外分光光度计测定DNA浓度，用双蕉水调整DNA浓度为1130ng／J』L。2．PCR扩增：(1)引物序列分别为：扩增St'VL~t基因7号外显子引物为5'-AGACFAII2AACITAA~’VKI'GATC3、5丌I丌邢几rI1’3，其中第2条引物为错配引物；扩增SmNt基因8号外显子引物为5'-(vrA~(、(AAI’(：凸dAA3、5一(=1(rrIIlA(G一3(2)R反应体系为50L，其中4×dNT[4L(最终浓度200／mlol／L)，l0×Buffer5ItL，引物均为l"L(最终含25pmo1)，Taq酶0．5L(最终含2．5U)，DNA模板6tI，加入双蒸水32．5I。每次实验均设阳性和阴性时照(阳性患者DNA样品由宾夕法尼亚大学陈克连先生惠赠)。采用PCR自动扩增仪扩增。(3)PCR反应条件为94℃预变性5rain，95℃变性l5s，第7外显子55℃退火l5S，第8外显子60℃退火15s，72℃延伸l5s，共40个循环，最后72℃延伸8rain。3．RFLP分析：酶切体...
