体外培养细胞的生长与增殖过程VIP免费

第四章动物细胞与组织培养(AnimalCellandTissueCulture)动物体内取出组织和细胞，在体外模拟机体内的生理条件，建立无菌、适温和一定的营养条件，使之生长和生存，并维持其结构和功能的技术，称动物细胞与组织培养。是动物细胞工程的重要技术基础：细胞融合、组织工程、胚胎工程、干细胞工程、动物克隆、动物细胞产品的大规模制备技术等等都离不开～。4.14.1概述概述4.1.14.1.1发展历史发展历史4.1.24.1.2动物细胞的特点动物细胞的特点4.1.34.1.3动物细胞与组织培养的概念动物细胞与组织培养的概念4.1.44.1.4动物细胞的体外培养生长特性动物细胞的体外培养生长特性4.1.1发展历史1、动物细胞（组织）培养技术的起源：19世纪所应用的胚胎学技术。动物细胞培养的奠基人：美国生物学家哈里森（1907年）用盖玻片覆盖凹窝玻璃悬滴培养法将蛙胚神经组织培养在淋巴液中，存活几周，有细胞突起的生长过程。先驱者中法国学者卡勒尔：设计卡氏培养瓶自1923年用于培养鸡胚的心肌组织成功以后，已使多种动物组织培养获得成功。4.1.1发展历史2、20世纪40年代以后：动物组织培养的科学家们研究重点集中在培养基方面。3、20世纪80年代以后：随着基因工程技术和细胞融合技术的迅速发展，已能把特定的外源基因通过PCR技术扩增几千倍，并可转染到细胞内，使其得到高质量的表达。4.1.1发展历史4、近年：淋巴细胞杂交瘤技术，使动物细胞培养进入了一个新领域。杂交瘤细胞能在体外悬浮情况下大量繁殖并产生单克隆抗体。随着基因重组和单克隆抗体技术的发展，动物细胞组织培养展现出越来越可观的工业化前景。4.1.2动物细胞的特点（一）动物细胞之间的连接特点：1.紧密连接：牢固、无间隙。2.间隙连接：2-3nm间隙。3.隔壁连接：20-30nm间隔，有横隔。4.中间连接：无横隔、透明，间隔20-30nm。5.桥粒连接：有间隙，有纤维形成的特殊结构。4.1.2动物细胞的特点（二）动物细胞的培养特点：1.动物细胞比微生物细胞大，无细胞壁。2.动物细胞倍增时间长，生长缓慢，易受污染。3.培养过程需氧量少，对机械搅拌或剪切力敏感。4.动物细胞间主要以聚集体形式存在。5.原代细胞一般繁殖50代左右即退化死亡。4.1.3动物细胞与组织培养的概念动物细胞与组织培养：从动物体内取出细胞或组织，模拟体内的生理环境条件，在无菌、适宜温度和丰富营养条件下，使离体细胞或组织生存、生长并维持结构和功能的一门技术。是动物细胞工程的重要技术基础。4.1.4体外培养细胞的分型贴附和非贴附生长：1.贴附型细胞：细胞间相互接触；细胞与细胞外基质（培养器皿壁或载体）结合。多数细胞属贴附型细胞。2.非贴附型细胞：此类细胞体外生长不必贴壁，可在培养液中悬浮生长。如：白细胞、淋巴细胞，肿瘤细胞、杂交瘤细胞、转化细胞系等。BMP图象贴附型细胞(anchorage-dependentcell)哺乳动物大多数细胞必须附着固体表面生长。当细胞布满表面（单层）时，即停止生长。若取走一片细胞，存留的细胞就会沿着表面生长而重新布满表面。从生长表面脱落而进入液体的细胞通常不再生长而逐渐退化。（为单层附壁培养）按培养细胞的形态，可分四类：1.成纤维型细胞(fibroblast)外形与体内成纤维细胞相似，梭形或不规则形。细胞贴壁后呈梭形，胞质外伸出2-3个长短不同的突起，成放射状，胞间疏松。起源于中胚层的细胞在体外培养时一般表现为这种形式。贴附型细胞2.上皮型细胞(epithelium)：泛指形状上类似上皮细胞的细胞。特点：扁平状，形态较为规则。胞间紧密，单层贴壁。起源于内、外胚层的细胞体外培养时如此。3.游走型细胞(wandering)：类似巨噬细胞样的特征。外形不规则。分散生长，不连接成片，成群落；通常伸出伪足和突起，贴壁位置不固定，呈活跃的游走和变形运动。单核巨噬细胞系细胞体外培养常如此：颗粒性白细胞、淋巴细胞、单核细胞、巨噬细胞、肿瘤细胞。贴附型细胞4.多形型细胞(polymorphic)：形态上不规则（难以确定其形态）的细胞。细胞胞体略呈多角形；细胞胞突细长形；类似丝状伪足。如神经元和神经胶质细胞影响细胞形态的主要因素细胞的来源不同；生理条件不同，功能状态不同；血清成分、培养基成分、添加成...