肝细胞生长因子对自发性高血压大鼠心肌细胞凋亡的影响VIP专享VIP免费

安徽医科大学学报ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2012Aug；47(8)·915·肝细胞生长因子对自发性高血压大鼠心肌细胞凋亡的影响鲍勇，王邦宁，胡泽平，程源，陈大年，刘敏，宋兵摘要目的探讨局部心肌注射重组腺病毒一肝细胞生长因子(Ad—HGF)对自发性高血压大鼠(SHR)心肌细胞凋亡的影响。方法30只SHR为心肌纤维化模型，随机抽取6只作为阳性对照组，其余24只再随机平分为腺病毒组、Ad—HGF组。腺病毒组、Ad—HGF组SHR开胸，左心室壁5点分别注射0．1mlnull-Ad5和5×10Pftt／mlAd5一HGF，术后两组分别存活8只和1O只，于4周时处死其中6只。处死前测量左心室内压，ELISA法测定心肌HGF浓度，放射免疫法检测血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)浓度，免疫组化法及图像分析系统分析心肌Bcl-2和Bax水平，心肌细胞凋亡指数检测采用TUNEL，Westernblot法测定HGF、AT1R、Bcl一2和Bax的蛋白表达。结果与阳性对照组相比，Ad．HGF组左室内压表现为左心室舒张末压(LVEDP)下降(P<0．05)、左心室压力最大下降速度(～dp／dt⋯)下降(P<0．05)，左心室压力最大上升速度(+dp／dt⋯)上升(P<0．05)。心肌HGF、抗细胞凋亡蛋白Bcl-2显著升高(P<0．05)；AnglI、AT1R与促细胞凋亡基因Bax水平，心肌细胞凋亡指数明显降低(P<0．05)。结论Ad—HGF可以降低SHR左心室心肌细胞凋亡指数，其作用机制可能与HGF抑制AngⅡ、AT1R、Bax，上调Bcl-2，提高Bcl一2／Bax比例，同时降低心室壁压力有关。关键词心肌细胞凋亡；重组腺病毒一肝细胞生长因子；AngⅡ；Bax；Bcl一2中图分类号R332文献标志码A文章编号1000—1492(2012)08—0915～05在原发性高血压中，肾素一血管紧张素系统(renin—angiotensinsystem，RAS)的激活以及心室容量和压力负荷的增加均可以诱导心肌细胞凋亡，严重的心肌细胞凋亡可导致相邻细胞移行，造成室壁变薄和室腔扩张，最终引发心衰¨j。肝细胞生长因子(hepatocytegrowthfactor，HGF)是一种问质细胞来源的多功能细胞因子，具有多种生物学活性，有很强的促进血管内皮细胞有丝分裂、抑制细胞凋亡与2012—04—05接收基金项目：安徽省自然科学基金项目资助(编号：11040606M157、1104O606Q20)；安徽省高等学校省自然科学研究项目(编号：KJ2011Z213)作者单位：安徽医科大学第一附属医院心血管内科，合肥230022作者简介：鲍勇，男，主治医师，硕士研究生；王邦宁，女，教授，主任医师，博士生导师，责任作者，E．mail：wangbangning@medmail．COII1．cn组织重构的作用，对心血管系统有重要的保护作用。该实验通过局部注射重组腺病毒一肝细胞生长因子(Ad—HGF)基因，观察HGF局部高表达对自发性高血压大鼠(SHR)左心室心肌细胞凋亡的影响，旨在探讨HGF在抗心肌细胞凋亡过程中对血管紧张素II(AngI1)、血管紧张素I／1型受体(AT1R)、Bax、Bcl-2及心室壁张力的作用关系。1材料与方法1．1材料1．1．1实验动物SPF级SHR30只，体重(200±10)g，14周龄，雄性，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，动物编号：SCXK(京2006-0009)。由安徽医科大学实验动物中心提供标准饲料，分笼饲养，每笼各3只，在恒温(22±4)qC条件下饲养。SHR毛呈白色，14周龄时平均血压22．7～24．0kPa，最高可达26．7kPa以上，无明显原发性肾脏或肾上腺损伤，心血管发病率高。SHR的高血压心血管并发症、外周血管阻力变化、对盐的敏感性与人类相似，是目前国际公认的最接近于人类原发性高血压的动物模型。1．1．2主要试剂Ad—HGF购于中国军事医学科学院放射研究所。ELISA试剂盒(上海源叶生物科技有限公司)；TUNEL凋亡试剂盒(武汉博士德生物科技有限公司)；小鼠抗人HGF、AT1R、Bcl-2、Bax单克隆抗体(SantaCruz公司)。1．2方法1．2．1分组并处理30只SHR随机抽取6只作为阳性对照组，其余24只再随机平分为腺病毒组、Ad—HGF组。腺病毒组、Ad—HGF组SHR称重后用10％水合氯醛(6ml／kg)腹腔注射麻醉，经口腔气管插管，接HX一小动物呼吸机(成都泰盟科技有限公司)，SHR胸廓随呼吸机频率起伏提示插管成功。呼吸机参数设计为：呼吸频率7O～80次／分，潮气量6～10ml，呼吸比l：2。在SHR左胸第3肋间处通过2．5～3cm开口暴露心脏。将0．1ml5×10Pfu／mlAd．HGF通过注射的方式直接转染...