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肝细胞生长因子对自发性高血压大鼠心肌细胞凋亡的影响VIP免费

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安徽医科大学学报ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2012Aug;47(8)·915·肝细胞生长因子对自发性高血压大鼠心肌细胞凋亡的影响鲍勇,王邦宁,胡泽平,程源,陈大年,刘敏,宋兵摘要目的探讨局部心肌注射重组腺病毒一肝细胞生长因子(Ad—HGF)对自发性高血压大鼠(SHR)心肌细胞凋亡的影响。方法30只SHR为心肌纤维化模型,随机抽取6只作为阳性对照组,其余24只再随机平分为腺病毒组、Ad—HGF组。腺病毒组、Ad—HGF组SHR开胸,左心室壁5点分别注射0.1mlnull-Ad5和5×10Pftt/mlAd5一HGF,术后两组分别存活8只和1O只,于4周时处死其中6只。处死前测量左心室内压,ELISA法测定心肌HGF浓度,放射免疫法检测血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)浓度,免疫组化法及图像分析系统分析心肌Bcl-2和Bax水平,心肌细胞凋亡指数检测采用TUNEL,Westernblot法测定HGF、AT1R、Bcl一2和Bax的蛋白表达。结果与阳性对照组相比,Ad.HGF组左室内压表现为左心室舒张末压(LVEDP)下降(P<0.05)、左心室压力最大下降速度(~dp/dt⋯)下降(P<0.05),左心室压力最大上升速度(+dp/dt⋯)上升(P<0.05)。心肌HGF、抗细胞凋亡蛋白Bcl-2显著升高(P<0.05);AnglI、AT1R与促细胞凋亡基因Bax水平,心肌细胞凋亡指数明显降低(P<0.05)。结论Ad—HGF可以降低SHR左心室心肌细胞凋亡指数,其作用机制可能与HGF抑制AngⅡ、AT1R、Bax,上调Bcl-2,提高Bcl一2/Bax比例,同时降低心室壁压力有关。关键词心肌细胞凋亡;重组腺病毒一肝细胞生长因子;AngⅡ;Bax;Bcl一2中图分类号R332文献标志码A文章编号1000—1492(2012)08—0915~05在原发性高血压中,肾素一血管紧张素系统(renin—angiotensinsystem,RAS)的激活以及心室容量和压力负荷的增加均可以诱导心肌细胞凋亡,严重的心肌细胞凋亡可导致相邻细胞移行,造成室壁变薄和室腔扩张,最终引发心衰¨j。肝细胞生长因子(hepatocytegrowthfactor,HGF)是一种问质细胞来源的多功能细胞因子,具有多种生物学活性,有很强的促进血管内皮细胞有丝分裂、抑制细胞凋亡与2012—04—05接收基金项目:安徽省自然科学基金项目资助(编号:11040606M157、1104O606Q20);安徽省高等学校省自然科学研究项目(编号:KJ2011Z213)作者单位:安徽医科大学第一附属医院心血管内科,合肥230022作者简介:鲍勇,男,主治医师,硕士研究生;王邦宁,女,教授,主任医师,博士生导师,责任作者,E.mail:wangbangning@medmail.COII1.cn组织重构的作用,对心血管系统有重要的保护作用。该实验通过局部注射重组腺病毒一肝细胞生长因子(Ad—HGF)基因,观察HGF局部高表达对自发性高血压大鼠(SHR)左心室心肌细胞凋亡的影响,旨在探讨HGF在抗心肌细胞凋亡过程中对血管紧张素II(AngI1)、血管紧张素I/1型受体(AT1R)、Bax、Bcl-2及心室壁张力的作用关系。1材料与方法1.1材料1.1.1实验动物SPF级SHR30只,体重(200±10)g,14周龄,雄性,购自北京维通利华实验动物技术有限公司,动物编号:SCXK(京2006-0009)。由安徽医科大学实验动物中心提供标准饲料,分笼饲养,每笼各3只,在恒温(22±4)qC条件下饲养。SHR毛呈白色,14周龄时平均血压22.7~24.0kPa,最高可达26.7kPa以上,无明显原发性肾脏或肾上腺损伤,心血管发病率高。SHR的高血压心血管并发症、外周血管阻力变化、对盐的敏感性与人类相似,是目前国际公认的最接近于人类原发性高血压的动物模型。1.1.2主要试剂Ad—HGF购于中国军事医学科学院放射研究所。ELISA试剂盒(上海源叶生物科技有限公司);TUNEL凋亡试剂盒(武汉博士德生物科技有限公司);小鼠抗人HGF、AT1R、Bcl-2、Bax单克隆抗体(SantaCruz公司)。1.2方法1.2.1分组并处理30只SHR随机抽取6只作为阳性对照组,其余24只再随机平分为腺病毒组、Ad—HGF组。腺病毒组、Ad—HGF组SHR称重后用10%水合氯醛(6ml/kg)腹腔注射麻醉,经口腔气管插管,接HX一小动物呼吸机(成都泰盟科技有限公司),SHR胸廓随呼吸机频率起伏提示插管成功。呼吸机参数设计为:呼吸频率7O~80次/分,潮气量6~10ml,呼吸比l:2。在SHR左胸第3肋间处通过2.5~3cm开口暴露心脏。将0.1ml5×10Pfu/mlAd.HGF通过注射的方式直接转染...

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