黑素细胞的分离与培养综述VIP免费

第8卷第4期2005年10月西安文理学院学报(自然科学版)JournalofXi’anUniversityofArts&Science(NatSciEd)Vo1．8No．4Oct．2005文章编号：1008—556412005}02—0012—04黑素细胞的分离与培养综述屈颖，齐浩，2(1．西北大学光子学与光电子技术研究所，陕西西安710069；2．陕西师范大学生命科学学院，陕西西安710062)摘要：离体培养的黑素细胞被广泛应用于黑素细胞的细胞生理、色素代谢、各种理化因子对黑素细胞的增殖和色素代谢的影响等研究领域．对黑素细胞的生物学特征作了简单介绍，重点介绍了细胞的来源、分离、培养、纯化和鉴定方法，最后对影响黑素细胞分离和培养的因素进行了讨论，从而为相关研究提供重要的细胞模型．关键词：黑色素细胞；体外培养；分离；纯化中图分类号：Q813．1．1文献标识码：A黑素细胞(melanocyte，MC)，又称黑色素细胞，主要位于表皮的基底层，与表皮细胞共同组成表皮黑素单位．黑素细胞中的黑色素能吸收大部分紫外线，从而保护和减轻由日光引起的皮肤损伤，是防止紫外线透入真皮的重要屏障．黑素细胞与很多疾病相关，包括皮肤过早老化甚至皮肤癌变．体外培养黑素细胞的方法很多．体外培养的黑素细胞提供了一个相对简单的研究系统，广泛应用于皮肤疾病发生机理的研究、皮肤疾病的治疗参数筛选．1黑素细胞的生物学特征黑素细胞起源于胚胎神经嵴，具有树状突起，属于腺细胞．在人体内几乎所有的组织内均可找到黑素细胞，但它们主要分布于表皮基底层．黑素细胞是皮肤的重要组成细胞之一，它以1：36比例与角质形成细胞构成表皮单位．黑素细胞通过合成黑色素形成皮肤颜色，同时可吸收紫外线，使机体免遭紫外线的损害[．黑素细胞合成的黑色素经由树状突起分泌进入角质形成细胞，随角质形成细胞的脱落而排出体外．2黑素细胞的分离2．1组织来源实验室中分离黑素细胞的组织来源主要是人和小鼠的皮肤．人的皮肤可取自外科手术，如美容术(面部、胸腹部等皮肤)[2,3]，乳房切除术(乳房皮肤)或包皮环切术(包皮)[4-7]等．人类面部皮肤及包皮中含有较多的黑素细胞，其数量约为表皮细胞的5％～7％，所以分离时最好选择包皮或面部皮肤．对于小鼠而言，一般取年龄为0．5d小鼠的背部皮肤u8'．2cm2的皮肤即可满足培养要求．2．2黑素细胞的分离黑素细胞的分离主要采用中性蛋白酶(DispaseⅡ)、胰蛋白酶、EDTA等进行消化，这些用于消化的收稿日期：2005—05—24基金项目：西北大学访问学者资助项目(03JF09)作者简介：屈颖(1979一)，女，陕西西安人，西北大学光子学与光电技术研究所硕士研究生*通讯作者：齐浩qh@snnu．edu．cn维普资讯http://www.cqvip.com第4期屈颖，等：黑素细胞的分离与培养综述13试剂可以单独使用也可以结合使用．取下的皮肤组织用0．05％洗必泰浸泡消毒10min，生理盐水漂洗数遍，剪成1×2舢112的小块，用2．5g／L的DispaseII酶4℃过夜消化(16～24h)；然后用镊子将表皮与真皮分离，将表皮组织置于2．5g／L的胰酶中室温消化10min，然后轻轻吹打，待瓶内液体混浊时加入适量血清终止消化，100目筛网过滤，收集滤液，1000r／min离心10min，弃上清，Jji,h,黑色素细胞培养液E3，．3黑素细胞的培养3．1黑素细胞常用培养液黑素细胞的基本培养液有DMEM[，，][4,12,13]、Ham[9,10]、RPMI1640培养液[11]等．Eagle培养液：Eagle研制成了细胞生长最低必需培养液MEM，是黑素细胞培养中较常用的培养液、DMEM是在MEM基础上经修改而成的，适用于多种细胞系和组织的生长．RPMI一1640培养液：该培养基能适应包括黑素细胞在内的多种细胞的生长，无论是原代和继代培养效果都不错，是目前细胞培养应用最多的培养基之一．Ham培养液：Ham在1962年研究了适应小鼠二倍体细胞克隆化的培养基，命名为F7，然后又对其进行改良，并相继研制出F10、F12．F10培养基不仅能够适应小鼠细胞也能适应人类二倍体细胞的培养；F12培养基的特点是在配方中加入了一定量的微量元素如cu2、zn2、Fe2等，可以在血清含量较少(2％～10％)的情况下培养细胞．Ham’F10和F12在黑素细胞培养中的应用也极为广泛．3．2添加剂及其作用皮肤组织中黑素细胞的数量较少，且细胞分裂能力弱，因此在体外培养时常须添加黑素细...