全反式维甲酸对鼠胚神经干细胞增殖和分化的作用VIP免费

ChineseJournalofReparativeandReconstructiveSurgery,February2008,Vol.22,No.2·206·全反式维甲酸对鼠胚神经干细胞增殖和分化的作用钟德君＃张德盛宋跃明【摘要】目的观察不同浓度的全反式维甲酸（all-trans-retinoicacid，ATRA）在鼠胚神经干细胞（neuralstemcells，NSCs）增殖和分化中的作用，寻找促NSCs分化为神经元的较佳ATRA浓度。方法分离孕12～16d（平均15d）胚胎大鼠脑皮层，用无血清但含神经生长因子（20ng/mLbFGF、20ng/mLEGF）的培养液悬浮培养，细胞接种密度为1×106/mL，7d传代。取第3代NSCs，分别在含0.5、1.0、5.0和10.0μmol/LATRA（实验组，分别为A、B、C、D组）及不含ATRA（对照组，E组）的DMEM/F12完全培养基中培养，于培养第1、2、3、4、5、6及7天倒置相差显微镜下计数形成的细胞球数；于培养后1、3、5、7及9d采用BrdU免疫荧光染色，分析各组细胞增殖效应。另取第3代NSCs，5%FBS培养基调整细胞密度为1×106/mL，接种至6孔板内，分别加入0.5、1.0、5.0和10.0μmol/LATRA，作为各实验组（即A、B、C、D组），对照组不含ATRA（E组），于培养后3、5及7d采用免疫荧光双标染色和流式细胞仪检测各组细胞分化为神经元的比例。结果培养后1、2、3、4、5、6及7d，各实验组增殖细胞球数目接近（P>0.05），但均明显少于对照组，且差异有统计学意义（P<0.05）；各实验组在培养后1、3、5、7、9dBrdU阳性细胞球增多，组间差异无统计学意义（P>0.05）；对照组各时间点BrdU阳性细胞球明显多于实验组，差异有统计学意义（P<0.05）。各实验组ATRA促使NSCs分化为神经元的比例明显增高，NSE阳性细胞分化率各组间差异有统计学意义（P<0.05），其中B组最高，在培养3、5、7d分别为29.46%±0.47%、47.25%±0.46%、66.81%±0.57%，而E组NSCs主要分化为星形胶质细胞，NSE阳性细胞分化率在培养3、5、7d分别为11.11%±0.59%、14.10%±0.32%、15.92%±0.70%。流式细胞仪检测显示，培养后3、7d，促神经元分化比例各实验组与对照组比较差异均有统计学意义（P<0.05）。结论ATRA具有显著的促NSCs分化为神经元的作用，1.0μmol/LATRA诱导分化效果最佳。【关键词】神经干细胞全反式维甲酸分化神经元大鼠中图分类号：R651.3Q813.3文献标志码：ATHEROLEOFALL-TRANS-RETINOICACIDONTHEPROLIFERATIONANDDIFFERENTIATIONOFRATEM-BRYONICNEURALSTEMCELLS/ZHONGDejun,ZHANGDesheng,SONGYueming.DepartmentofOrthopedics,WestChinaHospital,SichuanUniversity,ChengduSichuan,610041,P.R.China.Correspondingauthor:SONGYueming,E-mail:sym_cd@yahoo.com.cn【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheeffectivenessofall-trans-retinoicacid(ATRA)atdifferentconcentrationsonproliferationanddifferentiationoftheratembryonicneuralstemcells(NSCs),andtofindtheoptimalconcentrationofATRAthatpromotingthedifferentiationofNSCsintoneurons.MethodsNSCswereisolatedfromcerebralcortexofratembryos(embryonicday12-16,average15days),andwereculturedinserum-freemedium(DMEM/F12mediumcontaining20ng/mLbFGFand20ng/mLEGF)attheconcentrationof1×106cells/mL.Subcultureswereperformed7daysaftertheprimaryculture.Thecellclustersofthe3rdpassagewerecentrifugedanddividedinto5groups.Intheexperimentalgroups(groupsA,B,C,D),theATRAconcentrationwas0.5,1.0,5.0,10.0μmol/LinDMEM/F12completemediumrespectively,whileincontrolgroup(groupE),theATRAconcentrationwas0inDMEM/F12completemedium.Theproliferationrateofeachgroupwasanalyzedbycellcountingdaybydaytill7thday,andBrdUpositivecellcounting1,3,5,7,9daysafterculture.Inaddition,collectingthe3rdpassageNSCsanddividedinto5groups.Intheexperimentalgroups(groupsA,B,C,D),theATRAconcentrationwas0.5,1.0,5.0,10.0μmol/LinDMEM/F12mediumcontaining5%FBSrespectively,whileincontrolgroup(groupE),theATRAconcentrationwas0inDMEM/F12mediumcontaining5%FBS.ThecapacityofNSCsdifferentiationtowardneuronswasde-terminedbyimmuno...