裙带菜PSⅠ复合物的荧光特异性VIP专享VIP免费

植物学通报2004,21(4):444~448ChineseBulletinofBotany①国家自然基金重点项目(39890390)。②通讯作者。Authorforcorrespondence.E-mail:hongyanliu1214@163.com收稿日期：2003-04-08接受日期：2003-09-01责任编辑：崔郁英裙带菜PSⅠ复合物的荧光特异性①1刘洪艳2王广策②3侯和胜1(天津科技大学海洋科学与工程学院天津300450)2(中国科学院海洋研究所开放实验室青岛266071)3(辽宁师范大学生命科学学院大连116029)摘要以褐藻裙带菜（Undariapinnatifida）为实验材料，采用蔗糖密度梯度超速离心的方法，去污剂SDS为增溶剂（SDS:Chl＝20:1，4℃增溶20min），蔗糖密度梯度为60%、50%、40%、30%、20%、15%和10%，分离制备光系统Ⅰ(PSⅠ)复合物。结果表明,40%蔗糖层带所含色素蛋白复合物是PSⅠ复合物。利用红藻作参照对比，光谱结果表明从裙带菜中得到的PSⅠ复合物没有730nm的荧光峰。分析认为这是所有褐藻包括裙带菜PSⅠ复合物的荧光特异性。关键词裙带菜,PSⅠ复合物,730nmFluorescenceSpecificityofPSⅠComplexfromUndariapinnatifida1LIUHong-Yan2WANGGuang-Ce②3HOUHe-Sheng1(TianjinUniversityofScience&Technology,Tianjin300450)2(InstituteofOceanology,theChineseAcademyofSciences,Qingdao266071)3(LiaoningNormalUniversity,Dalian116029)AbstractAtechniqueforseparatingthepigment-proteincomplexesfrombrownalgaeUndariapinnatifidahadsomeimprovementinthiswork.Pigment-proteincomplexeswereisolatedbycen-trifugationondiscontinuoussucrosedensitygradientoftheSDS-treatedthylakoidmembranes.ThebestseparationwasobtainedwithdetergentSDS(SDS:Chl=20:1,solubilized20minat4℃),andsucrosedensitygradients(10%,15%,20%,30%,40%,50%,60%W/W).The40%sucroselayerrepre-sentedphotosystemⅠ(PSⅠ)complex.Incontrastwithredalgae,theresultssuggestedthatPSⅠcomplexfromUndariapinnatifidahadnosymbolof730nmfluorescencepeak.KeywordsUndariapinnatifida,PSⅠcomplex,730nmfluorescencepeakBarrett和Anderson(1977)首先分离到褐藻的P700-Chla-蛋白质复合物以来，不同研究者采用蔗糖密度梯度超速离心或PAGE技术从各种褐藻中分离到含有P700-PSⅠ复合物。有关褐藻PSⅠ复合物的荧光峰为:圆锥顶孢藻PSⅠ复合物的荧光峰在680nm和728nm(BarrettandAnderson,1980)；地中海囊链藻、锯齿形墨角藻（Fucusserratus）和马尾藻PSⅠ复合物的研究简报4452004刘洪艳等：裙带菜PSⅠ复合物的荧光特异性荧光峰在690nm和723nm(Peyriereetal.，1984);锯齿形墨角藻PSⅠ复合物的荧光峰在693nm和715nm;糖海带(Laminariasaccharina)PSⅠ复合物的荧光峰在690nm和724nm(Berkaloffetal.，1990)。从已经报道的结果来看，褐藻荧光发射峰依材料种类和分离方法的不同有一定差异，但都缺少高等植物730nm的荧光峰。裙带菜(Undariapinnatifida)属褐藻门，过去研究主要集中在增养殖方面，对其PSⅠ复合物没有开展研究。本文利用蔗糖密度梯度超速离心分离裙带菜PSⅠ复合物的实验方法参照Caron(1985)并有所改进。1材料与方法1.1材料裙带菜(Undariapinnatifida)采自青岛太平角汇泉湾低潮带。1.2类囊体膜的制备参照Strbac等(1994)。1.3类囊体膜的增溶膜增溶液为0.3mol.L-1Tris-HCl,pH8.0,含10%甘油和1%SDS。按SDS:叶绿素为20:1(W/W),向裙带菜类囊体膜悬浮液中加入增溶液,置4℃黑暗中,不停地振动增溶20min。1.4蔗糖密度梯度超速离心将增溶后的类囊体膜铺制在蔗糖梯度的最上层,蔗糖梯度为:60%、50%、40%、30%、20%、15%和10%，离心力为140000×g，4℃，时间为15h。1.5荧光发射和激发光谱类囊体膜悬浮液以及15h蔗糖密度梯度超速离心后所分离得到各个层带,测定荧光发射和激发光谱，样品的叶绿素浓度调整至200µg.mL-1，样品溶解在20mmol.L-1Hepes-NaOHpH7.4缓冲液，室温条件下进行光谱测定。采用日立850型荧光分光光度计，窄缝宽度为5nm。2实验结果2.1色素蛋白复合体的分离经过15h蔗糖密度梯度超速离心得到了5条含色素的条带(图1)。根据表1和表2的光谱图1色素蛋白复合物的分离结果Fig.1Theisolationresultofpig-ment-...