微循环学杂志,2009,19(3):9~10,15oC2009CHINESEJOURNALOFMICROCIRCULATION微循环学杂志2009年第19卷第3期基础与实验#*[基金项目]湖北省卫生厅基金资助项目(JX4B18)[作者单位]武汉大学人民医院普通外科,邮政编码武汉430060;通讯作者:王卫星,TEL:(027)88041911-6443本文2009-04-10收到,2009-05-27修回,2009-06-03接受重症急性胰腺炎大鼠肾上腺病理及超微结构变化*惠远见王卫星徐胜余佳张昌威邓文宏[中图分类号]R657.5+1[文献标识码]A[文章编号]1005-1740(2009)03-0009-03重症急性胰腺炎(SevereAcutePancreatitis,SAP)是外科常见急重症之一,易发生全身炎症反应综合症(SIRS)和多器官功能不全综合症(MODS)。危重症患者伴发肾上腺功能不全(AdrenalInsufficiency,AI)的发生率为30%~70%[1],导致皮质激素分泌相对不足,死亡率明显增加,近年来已引起学者们的广泛关注。SAP并发AI时病情危重、预后凶险[2]。尚未见SAP时肾上腺病理和超微结构改变的研究报道。本实验通过建立大鼠SAP模型,探讨SAP大鼠肾上腺皮质病理、超微结构的变化及意义。1材料与方法1.1动物分组和模型制备SPF级雄性Wistar大鼠36只,体重200~250g(湖北省疾病控制中心提供)。分为假手术组(SO组)和SAP组各18只,每组分为3、12、24h观察时间点,每个时间点6只。实验大鼠术前禁食12h,禁水4h,10%水合氯醛(0.3ml/100g)腹腔注射麻醉,无菌操作行上腹正中切口进腹,采用4.5号头皮针穿过十二指肠对系膜缘经乳头逆行插入主胰管,将5%牛磺胆酸钠溶液(STC,0.1ml/100g,购自美国Sigma公司)沿胰胆管逆行恒速(0.1ml/min)注射造模。夹闭主胰管5min后见胰腺出现出血、水肿,即表明造模成功,关腹。SO组大鼠开腹后仅翻动十二指肠和胰腺即关腹。术后两组大鼠均皮下补液(2ml/100g)。1.2标本采集术后3、12、24h按上述方法麻醉大鼠,心脏采血,2000r/min离心15min后分离血清于-20e保存备用。采用全自动生化分析仪(日本奥林巴斯2700)测定血淀粉酶。切取全部胰腺和双侧肾上腺,肉眼观察肾上腺病变,所取组织分别固定行光镜及电镜观察。1.3胰腺、肾上腺组织病理观察取胰头和右侧肾上腺组织10%甲醛固定,切片,HE染色,光镜观察组织病理改变。根据Schmidt等[3]提出的方法,对胰腺水肿、腺泡坏死、出血和脂肪坏死、炎症和血管周围炎性浸润等在光镜下进行病理评分。1.4肾上腺皮质超微结构观察取12h两组大鼠左侧肾上腺组织,用2.5%戊二醛、1%锇酸固定,EPON812包埋机(美国)包埋,LKB-V型超薄切片机(美国)切片,醋酸铀-柠檬酸铅染色,在H-300型透射电镜(美国)下观察。1.5统计学处理采用SPSS13.0软件分析,计量数据以均数?标准差(x?s)表示,组间比较采用两独立样本t检验。P<0.05表示差异有显著性意义。2结果2.1血淀粉酶活性和胰腺组织病理表现各时间点SAP组血淀粉酶活性均较SO组高(P<0.05)。胰腺组织光镜观察,SO组胰腺组织正常,未见水肿、出血及炎性细胞浸润;SAP组胰腺组织病理损害进行性加重,可见腺体破坏,腺泡水肿、坏死,间质出血,炎性细胞浸润。SAP组各时间点Schmidt病理评分均较SO组高(P<0.05)。见表1。2.2肾上腺大体观察SO组肾上腺包膜红润、光滑,未见包膜水肿、皂化斑等改变;SAP组肾上腺包膜紧张,水肿,周围筋膜皂化斑,以24h最为严重。表1二组血淀粉酶测定和胰腺Schmidt病理评分结果(x?s,n均=18)组别血淀粉酶(U/L)3h12h24h胰腺病理评分3h12h24hSO组1145.10?112.281136.58?106.931135.86?111.230.75?0.420.67?0.260.83?0.41SAP组4034.25?299.831)6268.56?295.321)6941.09?300.031)7.33?0.521)11.75?0.521)13.58?0.581)注:与SO组比较,1)P<0.05微循环学杂志2009年第19卷第3期基础与实验#2.3肾上腺皮质病理变化SO组各时间点肾上腺皮质无肿胀,间质无出血,未见炎性细胞浸润(图1A)。SAP组肾上腺组织损害进行性加重,3h皮质稍水肿,血窦扩张,腺体结构基本完整;12h皮质水肿加重,血窦内见红细胞瘀滞,周围较多渗出,少量炎性细胞浸润;24h皮质细胞变性,呈局灶性坏死,血窦明显充血扩张,片状出血,腺体结构严重破坏,炎性细胞浸润明显(图1B)。2.4肾上腺皮质超微结构观察SO组12h肾上腺皮质细胞界限清晰,胞核形态完整,染色质均匀一致,胞浆内大量卵圆形线粒体,嵴形态清楚,有较多椭圆形类脂滴(图2A)。SA...
