�基础研究�芸豆植物凝集素对小鼠体外受精的影响张丽芬�王昌梅�杨明洁�张�田�王敏康*云南师范大学生命科学学院(昆明,650092)摘�要�目的:观察芸豆植物凝集素(PHA)对小鼠体外受精的影响及途径。方法:在含不同浓度芸豆PHA的HTF培养液中进行体外受精或用该培养液预处理小鼠卵母细胞再授精,观察其对小鼠体外受精的影响。结果:在含500、1000和5000�g/mlPHA培养液中,精子被完全凝集,受精率为0;用含500、1000和5000�g/mlPHA预处理卵母细胞后,加入获能精子,受精率为0;在含50和200�g/mlPHA预处理实验中,受精率为11.2%和5.9%。而在未经PHA处理空白对照实验中的卵母细胞体外受精率为81.3%,卵母细胞受精发育成囊胚的比率为48.4%,并且对照实验中产生的部分胚囊经胚胎移植产出正常的仔鼠。结论:芸豆PHA既可作用于精子,也可作用于卵子,最终可有效抑制小鼠受精。关键词�芸豆PHA�体外受精�抑制受精�小鼠do:i10.3969/.jissn.1004-8189.2011.2EffectofphytohemagglutininoninvitrofertilizationinmiceZhangLifen,WangChangme,iYangMingjie,ZhangTian,WangMinkang*MinistryofEducation,SchoolofLifeSciences,YunnanNormalUniversity,Kunming650092Abstract�Objective:Toexploretheinfluenceofphytohemagglutinin(PHA)extractedfromPhaseolusvulgaris(whitekidneybean)oninvitrofertilizationinmice.Methods:OocytesisolatedfrommiceweretreatedwithdifferentconcentrationsofPHA.Thefertilizationratesinvitrowereevaluated.Results:InPHA-containedmediaatconcentrationfrom500to5000�g/m,lallspermswereaggregatedandtheirfertilizationrateswere0;in50�g/mland200�g/mlPHAcontainingmedia,fertilizationrateswere11.2%and5.9%,respectively.Bycontrast,thefertilizationrateofthecontrolwas81.3%.Amongthem,48�4%offertilizedoocytesdevelopedintoblastocystsandsomeoffspringswereproducedafterembryotransfer.Conclusion:PHAfromPhaseolusvulgarisiseffectivefortheinhibitionofinvitrofertilizationinmice.Keywords�Phytohemagglutinin;invitrofertilization;Inhibitionoffertilization;Mouse��已有的研究表明,凝集素不仅具有凝集血细胞、淋巴细胞、精子细胞等作用,而且参与了生物体内的一些重要生理和药理过程[1]。1973年,Oikawa等[2]报道了麦胚凝集素(WGA)可以阻止哺乳动物的受精。1974年Oikawa等[3]又报道了植物凝集素可抑制仓鼠的受精。Macedo等[4]也发现凝集素可抑制海兔的受精。涂喜庆等[5,6]观察到了植物凝集素对动物及人精子凝集的作用。本实验室曾观察从云南白芸豆中提取的芸豆植物凝集素(PHA)对不同种类哺乳动物精子的作用和阴道给药对小鼠避孕基金项目:国家自然科学基金项目(30560056;30860128);云南省中青年学术技术带头人后备人才培养计划(2005PY01);云南省教育厅科研基金资助(06Y1168;07Z11378)收稿日期:2010-10-12�修回日期:2010-12-31*通讯作者:wangmk1998@163.com效果。结果表明,低浓度PHA(100~800�g/ml)作用下30min可使人、小鼠、牛、羊和兔的精子完全发生凝集;而>1250�g/mlPHA可使精子完全制动并发生致死[7]。为研究PHA的抑制受精过程和相关机理,我们采用含不同浓度梯度芸豆PHA的受精液来进行体外受精,在含有PHA的培养液预处理卵母细胞后再进行体外受精,分别观察记录受精及胚胎发育情况,以了解PHA对小鼠体外受精的影响,为有关机理和应用研究积累资料。1�材料与方法1.1�实验材料1.1.1�实验动物�健康的昆明系雌、雄小白鼠[许可证号:SCXK(川)2004-16],平均体重255g,购自81中国计划生育学杂志2011年2月第19卷第2期�ChinJFamPlann,Vo.l19,No.2,February2011四川省医学科学院实验动物研究所,饲养观察1周后用于实验。实验动物的饲养条件为人工控温22~26,光周期14L:10D,湿度为60%~80%,自由取食、饮水。饲料为苏州实验动物饲料科技有限公司生产小鼠全价颗粒料[批准文号:苏E饲字(2002)006]。1.1.2�实验试剂及仪器�芸豆植物凝集素为本实验室从云南省丽江市出产的大白芸豆中提取,蛋白质含量采用凯氏定氮和双缩脲法测定。凝集活性测定按Sigma公司标准采用...
