1．为了获得植物次生代谢产物，先用植物外植体获得愈伤组织，然后在液体培养基中悬浮培养。请回答下列问题：(1)外植体经诱导后形成愈伤组织的过程称为________。(2)在愈伤组织悬浮培养时，细胞干重、蔗糖浓度和pH的变化如图所示。细胞干重在12d后下降的原因有______________________；培养液中蔗糖的作用是________________、________________。(3)多倍体愈伤组织细胞产生的次生代谢产物量常高于二倍体。二倍体愈伤组织细胞经________处理，会产生染色体加倍的细胞。为检测愈伤组织细胞染色体数目，压片前常用纤维素酶和________酶解离愈伤组织。若愈伤组织细胞(2n)经诱导处理后，观察到染色体数为8n的细胞，合理的解释是_______________________________、________________________________________________。(4)为了更好地获得次生代谢产物，生产中采用植物细胞的固定化技术，其原理与酵母细胞固定化类似。下列说法正确的有________(填序号)。①选取旺盛生长的愈伤组织细胞包埋②必须在光照条件下培养③培养过程中需通空气④固定化后植物细胞生长会变慢答案(1)脱分化(2)蔗糖浓度下降，pH降低提供能源调节渗透压(3)秋水仙素(低温)果胶经加倍到4n的细胞处于有丝分裂后期经加倍到8n的细胞处于有丝分裂中期(4)①③④解析(1)外植体经脱分化可形成愈伤组织。(2)分析坐标曲线图，可见培养液中的蔗糖浓度已降至较低，pH也由6降为4，因此使得细胞生命活动受阻，细胞干重减小。培养液中的蔗糖可为培养的细胞提供能源，又可调节培养液的渗透压。(3)二倍体愈伤组织经秋水仙素、低温等人工诱导处理，可产生染色体数目加倍的细胞。植物细胞之间除纤维素外，还存在果胶层，因此可利用纤维素酶和果胶酶解离愈伤组织。愈伤组织细胞(2n)经人工诱导后，细胞中染色体数目加倍成4n，染色体数为4n的细胞进行有丝分裂，处于有丝分裂后期的细胞中含有8n条染色体；若加倍到4n的细胞经诱导后继续加倍形成染色体数为8n的细胞，这样的细胞再进行有丝分裂，在中期时会看到染色体数为8n的细胞。(4)通过愈伤组织获得次级代谢产物时，需选择生长旺盛的细胞，由于植物细胞进行有氧呼吸，培养过程需通入空气。愈伤组织细胞没有叶绿体，不进行光合作用，不需光照。植物细胞固定化后，与外界环境的物质交换能力降低，生长变慢。2．某年我国某地由于柑橘大实蝇的危害，橘农遭受到了很大的损失，当地政府想尽一切办法帮助橘农尽量减少损失。(1)有人想提取橘皮精油获取利润，一般提取橘皮精油的方法是________法。(2)橘皮精油的提取若采取水蒸气蒸馏法，会出现原料________和有效成分________等问题。(3)某橘农发现自家有一株橘树具有抗虫性状，通常选取________作材料进行植物组织培养大量繁殖无病毒植株。若用花药进行离体培养，则选择花粉发育至________期的花药培养成功率最高。确定花粉发育时期最常用的方法有________法，某些植物的花粉不易着色，需采用________法。(4)影响植物组织培养的因素很多，其中最关键的激素有________。在进行植物组织培养时需保证细胞处于离体状态，原因是_____________________________________________________。答案(1)压榨(2)焦糊水解(3)茎尖或芽尖单核醋酸洋红焙花青—铬矾(4)生长素和细胞分裂素在柑橘个体发育过程中，不同细胞中遗传信息执行情况不同，细胞分化形成不同的组织和器官解析(1)(2)水中蒸馏的方法对于有些原料不适用，如柑橘，这是因为水中蒸馏会导致原料焦糊和有效成分水解等问题，因此柑橘芳香油制备一般采用压榨法。(3)一般来说，在单核期，细胞核由中央移向细胞一侧的时期，花药培养成功率最高。选择单核期以前的花药接种，质地幼嫩，极易破碎，选择单核期以后的花药接种，花瓣已有些松动，又给材料的消毒带来困难。确定花粉发育时期最常用的方法有醋酸洋红法，某些植物的花粉不易着色，需采用焙花青—铬矾法，这种方法能将花粉细胞核染成蓝黑色。(4)植物组织培养时最关键的激素是生长素和细胞分裂素；在进行植物组织培养时需保证细胞处于离体状态，原因是在柑橘个体发育过程中，不同细胞中遗传信息执行情况不同，细胞分化形成不同的组织和器官。
