第2节基因工程及其应用1.概述基因工程的原理和应用
(重、难点)2.了解转基因生物和转基因食品的安全性
基因工程的基本操作工具1.基因工程的概念2.基因工程的操作工具(1)“剪刀”和“针线”:项目名称作用“剪刀”限制酶识别特定的核苷酸序列,并在特定的切点上切割DNA分子“针线”DNA连接酶连接脱氧核糖和磷酸之间的缺口(2)运载体:①作用:将外源基因送入受体细胞
探讨:EcoRI限制酶只能识别GAATTC的序列,并在G和A之间将这段序列切开,产生黏性末端,请写出切割后产生的黏性末端
提示:GAATTCCTTAAG探讨:不同的限制酶切割形成的黏性末端一定不能连接在一起吗
提示:不一定
例如,限制酶1的识别序列和切点分别是GGATCC在G和G之间切开,限制酶2的识别序列和切点分别是GATC在G之前切开,两者形成的黏性末端是可以互补配对并连接在一起的
探讨:下图表示一段DNA序列,请确定限制酶和DNA连接酶的作用部位
提示:限制酶和DNA连接酶均作用于b部位
1.工具酶的作用比较(1)限制酶与DNA连接酶的比较:作用应用限制酶使特定部位的磷酸二酯键断裂用于提取目的基因和切割载体DNA连接酶在DNA片段之间重新形成磷酸二酯键用于重组DNA分子(重组质粒)构建(2)两者的关系可表示为:【特别提醒】(1)氢键的断裂和重新形成与限制酶和DNA连接酶无关,氢键的形成不需要酶的作用
(2)DNA连接酶无识别的特异性,能恢复两核苷酸间的磷酸二酯键,将两个DNA片段连接起来
2.运载体具备的条件(1)能在宿主细胞内稳定保存并大量复制——这是保证目的基因能在细胞分裂过程中复制并传递给子细胞的基础
(2)有多个限制酶切点——这是运载体能够接入多种目的基因所必备的条件
(3)有标记基因——这是检测目的基因是否导入受体细胞中的重要判断依据
1.如图所示为一项重要生物技术的关键步骤,X是获得外源基因