猪肺炎支原体的分离方法VIP专享VIP免费

江苏农业学报(JiangsuJ．ofAgr．Sci．)，2012，28(1):104～107韦艳娜，白昀，孔猛，等．猪肺炎支原体的分离方法［J］．江苏农业学报，2012，28(1):104-107．猪肺炎支原体的分离方法韦艳娜1，白昀1，2，孔猛1，冯志新1，刘茂军1，熊祺琰1，白方方1，吴叙苏1，邵国青1(1．江苏省农业科学院兽医研究所，农业部兽用生物制品工程技术重点实验室，国家兽用生物制品工程技术研究中心，江苏南京210014;2．南京天邦生物科技有限公司，江苏南京211102)收稿日期:2011-08-27基金项目:国家自然科学基金项目(31001080);江苏省农业自主创新基金项目［CX(10)215、CX(11)2059］作者简介:韦艳娜(1986-)，女，广西河池人，学士，实习研究员，主要从事动物重要传染病研究。(Tel)025-84390334;(E-mail)weiyanna05@163．com通讯作者:邵国青，(Tel)025-84391973;(E-mail)84391973@163．com摘要:为了寻求分离猪肺炎支原体更好的方法，本试验采用剪碎法、研磨法、匀浆法和灌洗法对猪肺组织进行处理，并研究了不同肺脏组织处理方法对猪肺炎支原体活力的影响。结果显示，剪碎法与灌洗法获得的处理液对猪肺炎支原体的影响小于研磨法与匀浆法。采用剪碎法、灌洗法和研磨法对100份猪肺组织进行猪肺炎支原体野毒株分离的结果显示，经PCR鉴定，剪碎法分离到1株猪肺炎支原体，分离率为1%;研磨法分离到7株猪肺炎支原体，分离率为7%;灌洗法分离到2株猪肺炎支原体，分离率为2%。以上结果表明，研磨法获得的组织处理液对支原体活力有一定的影响，但其分离率好于剪碎法和灌洗法。因此，研磨法是一种较好的猪肺炎支原体分离方法。关键词:猪肺炎支原体;分离培养中图分类号:S858．28文献标识码:A文章编号:1000-4440(2012)01-0104-04WaystoisolateMycoplasmahyopneumoniaeWEIYan-na1，BAIYun1，2，KONGMeng1，FENGZhi-xin1，LIUMao-jun1，XIONGQi-yan1，BAIFang-fang1，WUXu-su1，SHAOGuo-qing1(1．InstituteofVeterinaryMedicine，JiangsuAcademyofAgriculturalSciences，KeyLaboratoryofVeterinaryBiologicalEngineeringandTechnology，Minis-tryofAgriculture，NationalCenterforEngineeringResearchofVeterinaryBio-products，Nanjing210014，China;2．NanjingTech-BankBio-IndustryCo．Ltd．，Nanjing211102，China)Abstract:Fourmethods(shearingdirectlybyscissors，grindingbymortar，stirringbyhomogenatemachine，andlavagingfrombronchus)weredesignedtodealwithswinelungtissuetostudytheeffectsoftreatingmethodsontheisolationofMycoplasmahyopneumoniae．Theresultsshowedthatthemethodsofshearingandlavaginghadlessinfluenceontheac-tivityofMycoplasmahyopneumoniaethanthemethodsofgrindingandstiring．Threemethodsofshearing，lavagingandgrindingwereusedfortheisolationexperimentof100lungtissuessamples．Onevirulentstrainwasobtainedbythemethodofshearing，withtheisolationrateof1%．Sevenstrainswereobtainedbythemethodofgrinding，withtheisolationrateof7%．Twostrainswasobtainedbythemethodoflavaging，withtheisolationrateof2%．TheresultsindicatedthatthemethodofgrindingforisolationandcultureofMycoplasmahyopneumoniaewasbetterthanthemethodsoflavagingandshearing．Themethodofgrindingofferedafairlygoodref-erence．Keywords:Mycoplasmahyopneumoniae;isolationandculture猪支原体肺炎(Mycoplasmapneumoniaeofswine，MPS)又称猪气喘病或猪地方性肺炎(Enzooticpneumoniaofswine，EPS)，是由猪肺炎支401原体(Mycoplasmahyopneumoniae，Mhp)引起的一种猪慢性呼吸道传染病。该病在世界范围内广泛流行，中国地方猪种和杂交猪种尤为易感，给养猪业造成了重大损失。由于猪肺炎支原体对营养要求苛刻，使得其体外分离培养的难度很大，从而阻碍了后续病原学、血清学、免疫学、致病机制等研究的顺利推进［1］。因此猪肺炎支原体的分离培养技术对猪气喘病的研究尤为重要。目前国内常用的病肺块浸泡分离法的分离率较低，且杂菌污染的风险率较高。因此，本试验拟采用3种不同猪肺组织处理方法...