基因工程的基本操作程序2007-12-10【学习要求】1．简述基因工程的原理及技术分析基因工程研究的理论基础2．简述基因工程基本操作程序的四个步骤3．说出目的基因的获得、运载体的构建、目的基因的导入与检测等常用的方法及其基本原理【自主学习】1．基因工程的基本操作程序主要包括四个步骤：（1）__________________________________（2）__________________________________（3）__________________________________（4）__________________________________2．目的基因的获取——实施基因工程的第一步（1）目的基因的含义：主要指____________________________________（2）目的基因的获取途径：①从基因文库中获取目的基因（从自然界中已有的物种中分离出来）基因文库：部分基因文库：基因组文库：cDNA文库②利用PCR（聚合酶链式反应）技术扩增原理：DNA双链的原理，将基因的核苷酸不断地加以复制，使其数量呈方式增加。大致过程：用心爱心专心116号编辑基因工程也叫做基因拼接技术、重组DNA技术，是指在体外通过人工“剪切”和拼接等方法，对生物的基因进行改造和重新组合，然后导入受体细胞并使重组基因在受体细胞内表达。基因工程的诞生和发展大约经过了三个时期：1973-1976为开始期；1977-1981为发展期；1982年以后为迅猛发展和实际应用期。1973年，科恩和博耶实验获得重组质粒，重组DNA技术由此诞生。不久，有科学家将真核生物——非洲爪蟾的基因导入大肠杆菌，使大肠杆菌产生了非洲爪蟾的信使RNA（mRNA），表明真核生物的基因可以在原核生物中得到表达。1974-1976年，美国、日本、西欧等分别制定不同的安全条例。1977年，美国科学家使生长激素抑制素基因在大肠中表达成功。1978年，人胰岛素在大肠杆菌中成功合成。1979年，人生长激素基因在大肠杆菌中得以表达。1980年，人干扰素基因在大肠杆菌中成功表达。1982年，美国科学家帕米特培育成功带有大鼠生物激素基因的巨型小鼠，表明外源基因可以转入动物的受精卵基因组中并可以在受精卵发育成的新个体中表现出外源基因所决定的性状态。3．基因表达载体的构建（制备重组DNA分子）——基因工程的核心（1）构建目的：①____________________________________________________________②____________________________________________________________③____________________________________________________________（2）基因表达载体的组成（构建零件）及其作用（图解）结构名称存在部位作用启动子终止子标记基因目的基因4．目的基因导入受体细胞(转化受体细胞)(1)转化：(2)转化方法：导入植物细胞的方法导入动物细胞的方法导入微生物细胞的方法5．目的基因的检测与鉴定（1）分子水平的检测（筛选出获得目的基因的受体细胞）①检测转基因生物染色体的DNA上是否插入了目的基因（目的基因能否在真核生物中稳定遗传）DNA分子杂交技术②检测目的基因是否转录出mRNA（目的基因是否发挥功能）③检测目的基因是否翻译成蛋白质（2）个体生物学水平的鉴定（培养受体细胞、诱导目的基因表达、分离目的基因表达产物）用心爱心专心116号编辑【巩固练习】1、下列有关基因工程操作顺序的组合中，正确的一组是（）①目的基因的检测与表达②目的基因与运载体结合③将目的基因导入受体细胞④目的基因的提取A、①②③④B、④③②①C、④②③①D、③④②①2、下列属于基因运载体所必须具有的条件是（）①具有某些标记基因②具有环状的DNA分子③能够在宿主细胞中复制④具有多个限制性内切酶A、①②B、③④C、①③D、②④3、现在人们已经实现了分子水平上遗传物质的人工重组，下列实例中属于分子水平人工重组的项目是（）A．器官克隆B．能产生抗体的小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞的融合细胞C．人类基因组计划D．将人的α1抗胰蛋白酶基因导入到羊的DNA分子中4．基因工程技术可使大肠杆菌合成人的蛋白质。下列叙述不正确的是（）A．常用相同的限制性内切酶处理目的基因和质粒B．DNA连接酶和RNA聚合酶是构建重组质粒必需的工具酶C．可用含抗生素的培养基检测大肠杆菌中是否导入了重组质粒D．导入大肠杆菌的目的基因不一定能成功表达5．应用基因工程技术诊断...
