江苏省徐州市王杰中学高三生物总复习 生物化学与分子生物学技术实践导学案 苏科版VIP专享VIP免费

江苏省徐州市王杰中学高三生物总复习生物化学与分子生物学技术实践导学案苏科版【学习要求】蛋白质的提取和分离（A）【知识梳理】1．凝胶色谱法也称做，是根据分离蛋白质的有效方法。凝胶实际上是一些由构成的多孔球体，在小球体内部有许多贯穿的通道，相对分子质量不同的蛋白质分子通过凝胶时速度不同。相对分子质量较小的蛋白质进入凝胶内部的通道，路程，移动速度；而相对分子质量的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在移动，路程，移动速率。2．缓冲溶液作用是。3．电泳是指。电泳利用了待分离样品中各分子以及分子本身的、的不同，使带电分子产生不同的，从而实现样品中各种分子的分离。两种常用的电泳方法是和。在测定蛋白质分子量时通常使用。蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于以及等因素。4．蛋白质的提取和分离一般分为四步：、、和。5．样品处理(1)红细胞的洗涤：洗涤红细胞的目的是，采集的血样要及时采用分离红细胞，然后用胶头吸管吸出上层透明的，将下层暗红色的倒入烧杯，再加入，缓慢搅拌，低速短时间离心，如此重复洗涤三次，直至，表明红细胞已洗涤干净。(2)血红蛋白的释放：在和作用下，红细胞破裂释放出血红蛋白。(3)分离血红蛋白溶液：将搅拌好的混合溶液离心后，试管中的溶液分为4层。第1层为无色透明的，第2层为白色薄层固体，是，第3层是红色透明液体，这是，第4层是其他杂质的暗红色沉淀物。将试管中的液体用滤纸过滤，除去脂溶性沉淀层，于分液漏斗中静置片刻后，分出下层的红色透明液体。(4)透析：取1mL的血红蛋白溶液装入中，将透析袋放入盛有300mL的物质的量的浓度为20mmol／L的中，透析12h。透析可以去除样品中的杂质，或用于更换样品的。6．凝胶色谱操作：首先要制作；第二步是，因为，所以装柱前需要根据色谱柱的内体积计算所需要的凝胶量。在装填凝胶柱时，不得有存在，避免降低分离效果；第三步是。【课时练习】1．相对分子质量不同的蛋白质在凝胶中的进行过程可表示为图中哪一个()2．蛋白质提取和分离分为哪几步()A．样品处理、凝胶色谱操作、SDS一聚丙烯酰胺凝胶电泳B．样品处理、凝胶色谱操作、纯化C．样品处理、粗分离、纯化、纯度鉴定D．样品处理、纯化、粗分离、纯度鉴定3．将经处理破裂后的红细胞混合液以2000r／min的速度离心10min后，离心管中的溶液分为四层，从上到下的顺序依次是()A．血红蛋白、甲苯层、脂类物质层、沉淀层B．甲苯层、沉淀层、血红蛋白、脂类物质层C．脂类物质层、血红蛋白、甲苯层、沉淀层D．甲苯层、脂类物质层、血红蛋白、沉淀层4．下列操作正确的是()A．分离红细胞时采用低速长时间离心B．分离血红蛋白溶液是低速短时间离心C．红细胞释放出血红蛋白只需要加入蒸馏水就可．1D．透析时要用20mmol／L的磷酸缓冲液，透析12h二、多选题5．凝胶色谱操作不正确的是()A．将橡皮塞上部用刀切出锅底状的凹穴B．将橡皮塞下部用刀切出凹穴C．插入的玻璃管的上部要超出橡皮塞的凹穴底面D．将尼龙网剪成与橡皮塞下部一样大小的圆片6．选用红细胞作分离蛋白质的实验材料，下列不是其优点的是()A．血红蛋白是有色蛋白B．红细胞无细胞核C．红细胞蛋白质含量高D．红细胞DNA含量高7．下面关于对血红蛋白提取和分离的样品的处理措施中，正确的是()A．采集血样后要高速短时间离心获得血细胞B．洗涤三次后如上清液仍有黄色，可增加洗涤次数，否则血浆蛋白无法除净C．在蒸馏水和甲苯的作用下，细胞破裂，释放出血红蛋白D．释放血红蛋白后再经过离心，就可以使血红蛋白和其他杂质分离开来三、简答题8．红细胞含有大最血红蛋白，红细胞的机能主要是由血红蛋白完成，血红蛋白的主要功能是携O2或CO2，我们可以选用猪、牛、羊或其他脊椎动物的血液进行实验，来提取和分离血红蛋白。请回答下列有关问题：(1)实验前取新鲜的血液，要切记在采血容器中预先加入柠檬酸钠，取血回来，马上进行离心，收集血红蛋白溶液。以上所述的过程即样品处理，它包括、、收集血红蛋白溶液。(2)收集的血红蛋白溶液在透析袋中经过透析，这就是样品的粗分离。①透析的目的是。②透析的原理是。(3)通过凝胶色谱法将样品进一步纯化，最后经SDS一聚丙烯酰胺凝...