第1页共21页微生物限度检查SOP1.适用范围：适用于本公司各品种微生物限度检查。1.职责检验员：严格按SOP进行检验。QC主管：监督检查执行情况。2.定义微生物限度检查法系指非规定灭菌制剂及原、辅料、包材受到微生物污染程度的一种检查方法，包括染菌量及控制菌的检查。3.微生物限度检查的一般要求4.1环境要求微生物限度检查应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内进行。检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染。单向流空气区域、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。4.2.供试品检查时，如果使用了表面活性剂、中和剂或灭活剂，应证明其有效性及对微生物的生长和存活无影响。4.3培养温度要求除另有规定外，本检查法中细菌培养温度为30～35℃；霉菌、酵母菌培养温度为23～28℃；控制菌培养温度为35～37℃。4.4检验结果报告单位检验结果以1g、1ml、10g、10ml或10cm2为单位报告，包材按相应质量标准的规定进行。4.5抽样和样品保存4.5.1.按批号随机抽样，抽样量为检验用量（2个以上最小包装单位）的3倍量。4.5.2.抽样时，凡发现有异常或可疑的样品，选取有疑问的样品，但机械损伤、明显破裂的包装不得作为样品。4.5.3凡能从药品、瓶口（外盖内侧及瓶口周围）外观看出长螨、发霉、虫蛀及变质的药品可直接判为不合格品，无须再抽样检验。4.5.4.供试品在检验之前，保存于阴凉干燥处，勿冷藏或冷冻。4.5.5.供试品在检验之前，保持原包装状态，严禁开启，并保存在阴凉干燥处（勿冷藏或冷冻）。已开启样品不得作为供试品。4.6.主要仪器及器具恒温培养箱、生化培养箱、恒温水浴锅、电冰箱、超净工作台、生物显微镜、放大镜、电热恒温干燥箱、电热压力消毒器、药物天平、锥形瓶、研钵、培养皿（9cm）、量筒（100ml）、第2页共21页试管（18×180mm）、吸管（1ml）、棉塞、接种针、记号笔。5.检验量5.1检验量即一次试验所用的供试品量（g、ml或cm2））5.2所有剂型的检验量均需取2个以上包装单位。固体及粘稠性供试品的检验量为10g，液体制剂检验量为10ml；中药膜剂为50cm2；贵细药品、微量包装药品的检验量可以酌减。要求检查沙门菌的供试品，其检验量应增加10g或10ml。包材检验量按相应质量标准的规定进行。6.操作方法6.1.试验前准备6.1.1.将供试品及所有已灭菌的平皿、锥形瓶、匀浆杯、试管、量筒、吸管（1ml、10ml）、稀释剂等移至操作室内。准备好足够用量，避免操作中出入操作间。6.1.2.开启无菌室紫外杀菌灯和洁净工作台的空气过滤装置30min。6.1.3.操作人员用肥皂洗手，关闭紫外杀菌灯，进入缓冲间，换工作鞋，用消毒液洗手或用乙醇棉球擦手，穿戴好无菌衣、帽、口罩、手套等。6.1.4.操作前先用乙醇棉球擦手、工作台面，再用乙醇棉球擦拭供试品瓶、盒、袋等的开口处周围，待干后用灭菌剪刀或镊子将供试品启封。6.1.5.供试品制成供试液后，在1小时内注皿操作完毕。6.2.供试液的制备6.2.1.根据供试品的理化特性与生物学特性，采取适宜的方法制备供试液。供试液制备若需用水浴加温时，温度不应超过45℃。供试液从制备至加入检验用培养基，不得超过1小时。除另有规定外，常用的供试液制备方法如下。6.2.1.1.液体供试品取供试品10ml，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，混匀，作为1：10的供试液。油剂可加入适量的无菌聚山梨酯80使供试品分散均匀。水溶性液体制剂也可用混合的供试品原液作为供试液。6.2.1.2.固体、半固体或粘稠性供试品取供试品10g，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，用匀浆仪或其他适宜的方法，混匀，作为1：10的供试液。必要时加适量的无菌聚山梨酯80，并置水浴中适当加温使供试品分散均匀。6.2.1.3.需用特殊供试液制备方法的供试品6.2.1.4.非水溶性供试品方法1取供试品5g（或5ml），加至含溶化的（温度不超过45℃）5g司盘80、3g单硬脂第3页共21页酸镁甘油酯、10g聚山梨酯80无菌混合物的烧杯中，用无菌玻棒搅拌成团后，慢慢加入45℃的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，边加边搅拌，使供试品充分乳化，作为1：20的供试液。方法2取供试品10g，加至含2...
