浅析VIGS的作用机制VIP专享VIP免费

---------------本文为网络收集精选范文、公文、论文、和其他应用文档，如需本文，请下载--------------浅析VIGS的作用机制本文从网络收集而来，上传到平台为了帮到更多的人，如果您需要使用本文档，请点击下载按钮下载本文档（有偿下载），另外祝您生活愉快，工作顺利，万事如意！VIGS技术除在烟草（Gossele，等，2002）、番茄（张策等，2007）、豌豆（宋伟杰等，2007）和大豆（吕山花等，2010）等双子叶植物中应用成功外，许多单子叶植物病毒也被改建成载体，以便在单子叶植物中抑制基因表达(Oikawa，2007)。经过几年的发展，已有多种病毒载体在VIGS上成功应用，如烟草花叶病毒(tobaccomosaicvirus，TMV)、马铃薯X病毒、番茄金色花叶病毒(tomatogoldenmosaicvirus，TGMV)、烟草脆裂病毒(tobaccorattlevirus，TRV)、卫星病毒诱导的沉默系统(satellitevirus-inducedsilencingsystem，SVISS)、甘蓝缩叶病毒(cabbageleafcurlvirus，CbLCV)、玉米条纹病毒(maizestreakvirus，MSV)等(Burch-Smith等2004；王宏芝等，2005；Palmer等，1999)。大麦条纹花叶病毒(Lacomme等，2003)以及小麦矮缩病毒(wheatdwarfvirus，WDV)等(Matzeit等，1991)都已经用于基因沉默。BSMV，由于其广泛的寄主范围（McKinneyandGreeley，1965）使其成为单子叶寄主良好的RNA沉默载体（Holzberg等，2002）。这些载---------------本文为网络收集精选范文、公文、论文、和其他应用文档，如需本文，请下载-----------------------------本文为网络收集精选范文、公文、论文、和其他应用文档，如需本文，请下载--------------体的开发和利用为水稻和小麦等重要单子叶作物功能基因组研究提供了有效的工具。最近，感染单子叶植物的雀麦花叶病毒株Tall-fescue已经被改造用于VIGS，在重要的谷稻类作物中应用成功（Ding等，2006)。在改良植物品质方面基因沉默技术被认为具有极大的应用价值(Tang，2004)。李加瑞等应用RNA干扰技术以Wx基因为靶基因极大地降低了小麦中直链淀粉的含量，而HarvinderS.等应用VIGS技术以GBSS基因为靶基因也同样降低了小麦中直链淀粉的含量（HarvinderS.等2011）。Kusabs及同事更是采用RNAi技术生产出能降低麦谷蛋白表达水平的稻米种类LGC-1(lowgluteincontent)，给不能消化麦谷蛋白的肾脏病人带来福音。郭志鸿等（2008）采用RT-PCR技术分别克隆了马铃薯SBE1基因的片段SⅠ和SBE2基因片段SⅡ，并将SⅠ和SⅡ顺序连接得到融合片段SⅢ，构建了以SBE1基因和SBE2基因为靶标的RNA干扰载体pRNAiⅢ，通过农杆菌介导法转化马铃薯获得了表观直链淀粉含量介于%～%的转基因试管薯。根据VIGS的作用机制，理论上引起目的基因沉默的最小插入片段为23个核苷酸(Bartel，2004)，但在实际操作中23个核苷酸长度常常不能有效地启动目标---------------本文为网络收集精选范文、公文、论文、和其他应用文档，如需本文，请下载-----------------------------本文为网络收集精选范文、公文、论文、和其他应用文档，如需本文，请下载--------------基因沉默的发生，所以需要选择数倍于23nt的目标基因片段(Ekengren等2003；Ratcliff等1997)。但也不能过长(Thomas等，2001；JackieCampbell等，2010)。为了使目标基因能够有效的沉默，有人对此研究的结果表明以200~500bp插入片段的沉默效果最佳(Burch-Smith等，2004；Ekengren等，2003；Lu等2003b)。当然，也可能存在其它影响沉默效果的因素，如目标基因序列的核苷酸组成(Thomas等2001)、siRNA及目标序列的碱基对的热力学特性等(Khvorova等2003；Schwarz等，2003)。如何有效地使病毒载体转入植物细胞，是病毒在植物体内复制与转移，以及发生目标基因沉默的关键。目前通常把含目标基因的病毒载体转入农杆菌中，然后通过农杆菌介导法感染宿主植物。然而，农杆菌介导法在单子叶植物中尚未成功（姚丹青等，2009）。除此之外已发展了几种病毒嫁接方式，如牙签接种(Lu等2003a)、注射渗透(Fu等2005)、高压喷射(Liu等2002a)及真空渗透(Ekengren等2003)等。如果要在植物的局部区域获得有效的沉默，注射渗透技术比较理想(Fu等2005)。病毒的传播和植物的生长情况都会影响基因沉默的成功率，而...