1专题1基因工程基因工程的概念基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过________________________，赋予生物以_____________________，创造出______________________________________。基因工程是在____________上进行设计和施工的，又叫做__________________。（一）基因工程的基本工具1.“分子手术刀”——______________________________（1）来源：主要是从_______________中分离纯化出来的。（2）功能：能够识别双链DNA分子的某种_________的核苷酸序列，并且使每一条链中________部位的两个核苷酸之间的_______________断开，因此具有___________性。（3）结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：______________和_____________。2.“分子缝合针”——_________________(1)两种DNA连接酶（E·coliDNA连接酶和T4-DNA连接酶）的比较：①相同点：都缝合________________键。②区别：E·coliDNA连接酶来源于_______________，只能将双链DNA片段互补的_____________之间的磷酸二酯键连接起来；而T4DNA连接酶能缝合______________，但连接平末端的之间的效率较________。(2)与DNA聚合酶作用的异同:DNA聚合酶只能将________________加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键。DNA连接酶是连接________________的末端，形成磷酸二酯键。3.“分子运输车”——_______________（1）载体具备的条件：①_________________________________________________________。②__________________________________________________________。③__________________________________________________________。（2）最常用的载体是____________,它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌染色体之外，并具有_____________________的双链___________DNA分子。（3）其它载体：_________________________________(二)基因工程的基本操作程序第一步：__________________________1.目的基因是指：______________________________________________________。2.目的基因可采取_______________-获得，也可以用_____________________。人工合成目的基因的常用方法有________________和_________________。3.PCR技术扩增目的基因（1）原理：_____________________（2）过程：第一步：加热至90～95℃DNA解链；第二步：冷却到55～60℃，引物结合到互补DNA链；第三步：加热至70～75℃，热稳定DNA聚合酶从引物起始互补链的合成。第二步：____________________________1.目的：使目的基因在受体细胞中_____________，并且可以___________________，使目的基因能够_____________________________。2.组成：______________＋_________________＋__________＋____________________--（1）启动子：是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端，是______________识别和结合的部位，能驱动基因转录出mRNA，最终获得所需的蛋白质。（2）终止子：也是一段有特殊结构的________________，位于基因的尾端。（3）标记基因的作用：是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。常用的标记基因是_____________________。第三步：________________________________1.转化的概念：是目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持_______________的过程。2.常用的转化方法：将目的基因导入植物细胞：采用最多的方法是________________，其次还有基因枪法和花粉管通道法等。将目的基因导入动物细胞：最常用的方法是_______________。此方法的受体细胞多是____________。将目的基因导入微生物细胞：★原核生物作为受体细胞的原因是繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少，最常用的原核细胞是____________，其转化方法是：先用________处理细2胞，使其成为______________，再将重组表达载体DNA分子溶于缓冲液中与感受态细胞混合，在一定的温度下促进感受态细胞吸收DNA分子，完成转化过程。3.重组细胞导入受体细胞后，筛选含有基因表达载体受体细胞的依据是标记基因是否表达。第四步：_________________________________1.首先要检测转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因，...
