生物素标记抗体生物素标记抗体生物素标记反应简单、温和且很少抑制抗体活性，生物素标记的抗体可存放多年而不失活。能与生物素结合的二级试剂为亲和素和链霉亲和素，所需的各种标记物均可购置。此外，亲和素和链霉亲和素的结合背景水平非常低．结合紧密且快速。故可消除多步骤程序中的许多缺点。生物素拯记—尥王要优点是标记一抗后，再选用亲和素或链霉亲和素标记的二级试剂进行测定。抗体很容易与经过化学修饰的活化生物素结合。生物素又可以与结合有酶、荧光染料或放射性碘的亲和素或链霉亲和素连接，后者已有商品试剂供应。这样只需将纯化抗体与生物素结合，就可用各种不同的标记物来检测。链霉亲和素及亲和素与生物素的亲和力非常高(KalO15L/mol),并且二者间的相互作用实质上是不可逆的。由于链霉亲和素的等电点(pl)更适宜故其更常用，背量也因此较低。将生物素与抗体共价结合是一种非常简便和直接的标记方法。通常，生物素对抗体并无负面影响且标记条件温和，用亲和素或链霉亲和素标记试剂进行检测的敏感性与使用标记抗IZ抗体相同。Becker和Wichek(1972)、Heitzmann和Richards(1974)及Heggeness和Ash(1977)等提供了首次使用生物素与亲和素复合物的例证，而且Green(1963,1990)对两者的相互作用做了详细论述。大多数生物素酰基化反应是利用生物素的N—羟基琥珀酰亚胺酯。琥珀酰亚胺基可以与抗体上的自由氨基结合，通常是赖氨酰侧链。现在许多生物素酰基化酯均可购得。此类变构物改变了生物素的分子大小及其与偶合基团之间空间桥联臂的特性等。某些情况下，空间桥联臂起决定性作用。例如，较长的空间桥联臂可以使偶联物更容易接近生物素，其柔韧性也更好，尽管也更容易出现非特异结合。某些空间桥联臂可以劈开，这样就可在一定的控制条件下将抗体释放出来。表4．6列出许多可以利用的空间桥联臂及其特性。所有这些酯类均可用下列方法处理。如果没有其他特殊要求，一般推荐使用生物素N—羟基琥珀酰亚胺酯。可利用的空间桥联臂及其特性偶合基团化合物类型反应基团侧链原子数(个)12--NH2NSH—生物素羟基琥珀酰亚胺5溶解于DMSO或DMFS-NHS生物素羟基琥珀酰亚胺5水溶性NHS-X-生物素羟基琥珀酰亚胺溶解于DMSO或DMFS-NHS-X-生物素羟基琥珀酰亚胺12水溶性NHS-X-X-生物素羟基琥珀酰亚胺19溶解于DMSO或DMFS-NHS-X-X-生物素羟基琥珀酰亚胺19水溶性SH14生物素马来酰亚胺马来酰亚胺13溶解于DMSO或DMF生物素-BMCC马来酰亚胺16溶解于DMSO或DMF碘乙酰-X-生物素碘乙酰基溶解于DMSO或DMF任一基团光敏生物素35nm可见光14水溶性
