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40-免疫分型教程(1)正常骨髓免疫分型上图是正常骨髓经CD45、CD71、CD33染色后组成的CD45/SSC、CD71/CD33双参数散点图；通过这两个组合，能够分辨骨髓的正常细胞、检查是否有异常细胞存在、评估细胞的成熟情况。CD45/SSC图中可见：1，CD45强阳性SSC低信号的细胞群为淋巴细胞（褐色细胞群体）；2，中等强度的CD45表达，SSC信号最强的细胞群体为粒细胞（蓝色及红色细胞群体）；3，CD45表达与SSC信号介于淋巴细胞与粒细胞之间的是单核细胞群体（绿色细胞群体）；4，CD45阴性，SSC信号最低的有核红细胞和细胞碎片；CD33/CD71图中可见：1，CD33表达最强的单核细胞群体（绿色）；2，粒细胞CD33表达较单核弱，不成熟粒表达CD71，成熟后不表达。3，淋巴细胞、有核细胞和细胞碎片不表达CD33、CD71。CD11B/CD15图可用来评估髓系细胞向单核、粒分化的程度（随着髓细胞成熟，细胞逐步获得CD11B，粒细胞高表达CD15）：1，单核细胞（绿色）高表达CD11B，CD15中等到表达；2，粒细胞（蓝色及橘红色）高表达CD15，蓝色成熟粒CD11B表达较橘红色不成熟粒细胞强，幼稚髓细胞仅表达CD15而无CD11B。3，T、B淋巴细胞不表达CD15、CD11B，NK细胞表达CD11B而无CD15（红色细胞）。4，有核红细胞及碎片不表达CD15和CD11B。根据骨髓细胞CD45/SSC图中分布情况设门圈定各类细胞：R1门为成熟淋巴细胞；R2门为正常单核细胞位置；R3门正常粒细胞位置；R4门为幼稚淋巴细胞出现位置；R5门为有核红细胞或细胞碎片位置；R6门为幼稚髓细胞出现位置；白血病细胞通常会在R4、R6两门位置处出现。M0免疫分型M0:急性髓细胞白血病微分化型原始细胞在光镜下类似L2型细胞,核仁明显,胞浆透明,嗜碱性,无嗜天青颗粒及Auer小体,髓过氧化酶(MPO)及苏丹黑B阳性细胞<3%;电镜下,MPO(+);CD33或CD13等髓系标志可呈(+),淋巴系抗原通常为(-),但有时CD7+,TdT+;部分急非淋白血病可表现CD7+,TdT。形态学：幼稚细胞占骨髓有核细胞90%以上；肿瘤细胞不出现AUER小体；粒细胞缺少，MPO或苏单黑染色阴性。遗传学：染色体常有复杂的异常，特别是5和7号染色体。当病例伴T（9；22）时会出现淋系抗原。幼稚细胞群体的FS和SS信号低，在CD45/SS点图中特征性地与幼稚淋巴细胞区域相连。幼稚细胞至少表达一种骨髓抗原：CD13，CD33，但完全缺乏髓系成熟分化抗原：CD11B，CD15和CD16。相当一部分病例TDT阳性，但在肿瘤细胞上分布不均。肿瘤细胞通常淋系抗原阴性，但有时也会表达CD7或CD4；HLA-DR通常阳性，CD34则为阴性。有学者指出伴CD7和CD34同时表达的病人预后不佳。检测胞浆内MPO比CD33/CD13联合检测更为敏感。M0中MPO阳性率一般小于3%，如大于3%则要判定为M1。M0:HLA-DR+,CD34+,CD13+/-,MPO+,CD14-,CD11b-,TdT-/+to+/-骨髓样本类似纯化的培养细胞，在CD45/SSC图中可见到数量占绝大多数的一群幼稚细胞群体。这群异常细胞在的SSC信号较低，大小中等。幼稚细胞CD19、CD34阴性，但同时表达CD13和CD33。CD13表达稍弱，且抗原表达较CD33不均一。白血病细胞占了所有细胞群体的96%。HLA-DR在这些髓系细胞上不表达。这些幼稚细胞表型的情况是：CD13阳性，CD33阳性，CD34阴性，HLA-DR阴性。这个表型与AML-M3相以。肿瘤细胞不表达CD71、CD117、CD18、CD11b和CD15。CD64是阴性，但CD14表达。CD14表达强度比较弱与CD13相似。T细胞标志物CD2、CD5、CD3和CD7都不表达。在图中可观察到残存的一些T细胞。与阴性对照相比，CD4弱阳性表达。诊断：AML微分化型，CD34和HLA-DR阴性。实验室进一步诊断：MPO（免疫组化）阳性，NSE阴性，46XY，t(3;5)(q25;q34)重要说明：本例中白血病细胞免型表型为：CD34-、HLA-DR-，CD13+，CD33++，表面看与AML-M3相似。在许多幼稚细胞胞浆内存在的颗粒会导致AML-M3的误诊。但FCM的数据提供了一些有价值的信息避免这个错误。具体总结如下：（1）表达CD14（克隆号leu-M3），尽管表达有所降低；（2）SSC信号降低并且相对分散。这一点十分重要，因为AML-M3v的SSC信号比较集中，甚至M3v细胞中带有颗粒。另一重要信息是CD13表达下降甚至缺失而CD33强阳性（一种异常的CD13/CD33表达模式）。有时AML-M3可能会缺失表达CD13。对于这些疑难病例需要借助分子遗传...