新城疫抗体水平检测文稿归稿存档编号：[KKUY-KKIO69-OTM243-OLUI129-G00I-FDQS58-MG129]病毒颗粒红细胞Iamlate！抗体抗原新城疫的血凝和血凝克制实验高若开一、实验目的1.掌握血凝和血凝克制实验的基本原理、操作办法和成果鉴定办法。2.分析血凝和血凝克制实验的影响因素，用以拟定最佳免疫时间、鉴定免疫效果和辅助疾病诊疗。二、实验内容1.血凝实验(HA)检测新城疫抗原2.血凝克制实验(HI)检测新城疫抗体三、实验原理1.血凝实验（HA）原理：某些病毒或病毒的血凝素能选择性地使某种动物的红细胞发生凝集，这种凝集红细胞的现象称为血凝（HA）,也称直接血凝反映。2.血凝克制实验（HI）原理：当在病毒的悬液中加入特异性抗体，且这种抗体的量足以克制病毒颗粒或其血凝素时，则红细胞表面的受体就不能与病毒颗粒或血凝素直接接触。这时红细胞的凝集现象就被克制，称为红细胞凝集克制（HI）反映，也称血凝克制反映。四、实验材料离心机、恒温箱、冰箱、振荡器、96孔血凝版（5块）、微量移液器（20-100微升可调）、吸液尖（若干）、洗耳球、离心试管、普通试管、试管刷、烧杯、吸量管、一次性注射器、ND原则抗原、1%红细胞悬液、抗凝剂、生理盐水。五、实验环节（一）抗凝剂的配制将1克柠檬酸钠用25毫升生理盐水稀释备用。1毫升抗凝剂可用于采集9毫升血液。（二）10%红细胞悬液的配制1、用注射器吸取0.5毫升抗凝剂无免疫健康青年公鸡的红细胞4.5毫升。2、1500转离心5分钟，吸弃上清液。3、用5-10倍生理盐水1500转洗涤3次，前两次5分钟，后一次10分钟。4、吸弃上清液，用吸量管吸取红细胞，配制成10%红细胞悬液。5、2-6摄氏度储存，备用。（三）血凝实验（HA)1.在血凝板上第一排的1－12孔内各加入50ul生理盐水2.将系苗用生理盐水5毫升稀释，在第1孔内加入50ul病毒抗原，然后依次倍比稀释至第11孔，最后弃50ul。3.每孔加入1％鸡红细胞悬液50ul4.轻轻振荡均匀，后放于室温或37℃中静置30分钟5.成果鉴定血凝效价测定1234567891011122×4×8×16×32×64×128×256×512×1024×2048×红细胞对照生理盐水505050505050505050505050抗原5050505050505050505050弃50红细胞505050505050505050505050成果＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋－－－－成果鉴定原则1、＋＋＋＋：红细胞呈细沙样均匀铺于孔底，即100％凝集；2、＋＋＋：红细胞均匀铺于孔底，当边沿不整洁而稍向孔底集中，即75％凝集；3、＋＋：红细胞形成一种环状，四周有凝集块，即50％凝集；4、＋：红细胞于孔底形成圆团，边沿不够光滑，四周稍有凝集块，即25％凝集；5、－：红细胞于孔底形成圆团，边沿光滑整洁，即无凝集。血凝价的鉴定以100%凝集的病毒最大稀释度为该病毒的血凝价，即为一种凝集单位。上表看出，该新城疫病毒液的血凝价为1:32，则l:32为1个血凝单位，1:16、l:8分别为2、4个血凝单位，或将32/4=8，即1:8稀释的病毒液为4个血凝单位。（四）4个血凝单位抗原的配制根据鉴定成果，吸取1毫升已稀释的病原溶液再以8倍稀释，即为4个血凝单位的原则抗原。（五）血凝克制实验1、在血凝板上1－12孔内各加入50ul生理盐水；2、在第1孔内加入被检血清50ul，然后倍比稀释至第11孔，最后弃50ul；3、第1－12孔内加入4单位抗原50ul（第12孔为病毒对照）；4、每孔加入1％鸡红细胞悬液50ul；5、轻轻振荡均匀，后放于室温或37℃中静置30分钟6、成果鉴定血凝克制效价测定1234567891011122×4×8×16×32×64×128×256×512×1024×2048×病毒对照生理盐水505050505050505050505050血清5050505050505050505050弃504单位抗原505050505050505050505050红细胞505050505050505050505050成果－－＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋－成果鉴定原则1、＋＋＋＋：红细胞呈细沙样均匀铺于孔底，即100％凝集；2、＋＋＋：红细胞均匀铺于孔底，当边沿不整洁而稍向孔底集中，即75％凝集；3、＋＋：红细胞形成一种环状，四周有凝集块，即50％凝集；4、＋：红细胞于孔底形成圆团，边沿不够光滑，四周稍有凝集块，即25％凝集；5、－：红细胞于孔底形成圆团，边沿光滑整洁，即无凝集。血凝克制价的鉴定将反映...
