农药登记毒理学试验方法（DOC 80页）VIP专享VIP免费

中华人民共和国国家标准GB15670-1995农药登记毒理学试验方法ToxicologicaltestmethodsofPesticidesforregistration1主题内容与适用范围本标准规定了农药登记毒理学试验的方法、条件的基本要求。本标准适用于为农药登记而进行的毒理学试验。2急性经口毒性试验2．1目的求出试验农药对试验动物的半数致死剂量（LD50）；通过观察急性毒性效应的临床表现，初步估测毒作用的靶器官和可能的毒作用机理；为亚慢性、慢性和其他毒性试验的剂量水平设计提供参考；为急性毒性分级和制定安全防护措施提供依据。2．2试验农药原药和制剂。2．3试验动物2．3．1主要选用品系、遗传背景明确的初年大鼠。各剂量组内同性别动物体重差异应小于平均体重的10%，组间同性别动物体重均值差异应小于5%。2．3．2每一剂量组的大鼠8~10只（雌雄各半），试验前要对动物观察一周，确认健康后，方可使用。2．4剂量分组2．4．1至少应设4~5个剂量组，各剂量组之间要有适当的剂量间距。以便各组出现不同程度的毒性效应（死亡率），求得剂量效应曲线及LD50。2．4．2如剂量达5000mg/kg体重以上，动物仍不出现死亡，则不需要进行更高剂量的试验。2．5给药方法及观察时间2．5．1动物给药前应隔夜禁食但不禁水，称重后，一次灌胃给药，给药后至少间隔2h进食。2．5．2灌胃量大鼠按100g体重给1mL，小鼠按20g体重给0.4mL计算，灌胃可用水溶液、油溶液或悬液。2．5．3给药后立即观察并记录动物的中毒表现，症状出现和消失的时间及死亡时间。给药当日应连续观察，其后，每日至少观察2次，观察期为14d。如在给药96h后出现迟发性新效应，则应延长观察期至3周或4周。2．6观察指标2．6．1中毒症状全面观察中毒的发生、发展过程和规律以及中毒特点和毒作用的靶器官。观察的系统包括：a．中枢神经系统和神经肌肉系统：体位异常、叫声异常、不安、呆滞、痉挛、抽搐麻痹、运动失调、对外反应过敏或迟钝；b．植物神经系统：瞳孔扩大或缩小、流涎或流泪；c．呼吸系统：鼻孔流液、鼻翼煽动、呼吸深缓、呼吸过速、蜂腰；d．泌尿生殖系统：会阴部污秽、有分泌物、阴道或乳房肿胀；e．皮肤和毛：皮肤充血、紫绀、被毛蓬松、污秽；f．眼：眼球突出、结膜充血、角膜混浊；g．消化系统：腹泄、厌食。2．6．2体重给药前、死亡时各称量一次体重，观察期间每3d称量一次。2．6．3一般不做病理组织学检查和生化指标检验，但对死亡动物应做大体病理学观察。如24h以上的存活动物，肉眼检查有病变时应做病理组织学检查。2．7结果评定2．7．1用统计方法计算LD50值。计算方法见附录A（补充件）。2．7．2按农药的急性经口毒性分级标准进行评定（见表1）。表1急性经口毒性分级标准级别经口LD50,mg/kg剧毒高毒中毒低毒<55-5050-500>5003急性经皮毒性试验3.1目的了解农药对试验动物皮肤直接接触引起局部皮肤损伤、全身中毒的特征等毒性效应，求出半数致死剂量（LD50），为制定农药生产和应用中的防护措施提供依据。3．2试验农药原药和制剂。3．3试验动物3．3．1为有足够的涂药面积，首选成年大鼠，体重要求200-300g。3．3．2各剂量组大鼠8~10只（雌雄各半）。3．4剂量分组3．4．1至少应设4个剂量组，各剂量组应有一定的间距，使给药组能出现毒性表现和死亡。3．4．2如果2000mg/kg剂量仍不出现死亡时，则不需要再进行高剂量试验。3．5给药方法及观察时间3．5．1给药前24h背部去毛，注意勿损伤皮肤，涂药面积应占体表面积10%，大鼠4×5cm^2，兔12×14cm^2，豚鼠7×10cm^2。3．5．2液体农药用原药液，粉末农药用水或溶剂稀释。3．5．3先将动物固定，在略小于剃毛面积内进行定量敷药，然后覆盖一个与脱毛面积相当的盒式罩，再用胶布固定。以防止动物舔食试验药品。3．5．4涂药持续时间为4h。3．5．5涂药4h后取下罩盒，用温水洗去皮肤上的试验农药，再进行局部观察。3．5．6观察时间为2周。3．6观察指标3．6．1中毒的临床表现，参照2.6.1。3．6．2死亡时间及死亡率。3．7结果评定3．7．1用统计方法计算LD50值。计算方法见附录A（补充件）。3．7．2按农药的急性经皮毒性分级标准进行评定（见表2）。表1急性经皮毒性分级标准级别经皮LD50(4h),mg/kg剧毒高毒中毒低毒<2020...