细胞活力检测VIP免费

细胞活力检测在细胞群体中总有一些因各种原因而死亡的细胞，总细胞中活细胞所占的百分比叫做细胞活力(cellviability)。细胞活力测定方法有 MTT 法、克隆(集落)形成法、台盼蓝染色法、3H 放射性同位素掺入法等。其中 MTT 法以其快速简便，不需要特殊检测仪器、无放射性同位素、适合大批量检测的特点而得到广泛的应用。但 MTT 法形成的 Formazan 为水不溶性的，需要加有机溶剂溶解，由于在去上清操作时会有可能带走小部分的 Formazan，故有时重复性略差。为了解决这个问题，研究人员又开发了很多种水溶性的四氮唑盐类：如 CCK-8(WST-8)、XTT等。MTTMTT 分析法以活细胞代谢物还原剂 3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromide,MTT 噻唑蓝为基础。MTT 为黄色化合物，是一种接受氢离子的染料，可作用于活细胞线粒体中的呼吸链，在琥珀酸脱氢酶和细胞色素 C 的作用下 tetrazolium 环开裂，生成蓝色的 formazan 结晶，formazan 结晶的生成量仅与活细胞数目成正比(死细胞中琥珀酸脱氢酶消失，不能将 MTT 还原)。还原生成的 formazan 结晶可在含 50%的 N,N-二甲基甲酰胺和 20%的十二甲基磺酸钠(pH4.7)的 MTT 溶解液中溶解，利用酶标仪测定 490nm 处的光密度 OD 值，以反映出活细胞数目。也可以用 DMSO 来溶解。MTT 粉末和配置好的溶液都需要用铝箔纸包好避光保存。实验的时候尽量关闭超净台上的日光灯进行避光操作。步骤如下：1：接种细胞：用含 10％胎小牛血清的培养液配成单个细胞悬液，以每孔1000-10000 个细胞的密度接种到 96 孔板中，每孔体积 200ul.2：培养细胞：同一般培养条件，培养 3-5 天（可根据试验目的和要求决定培养时间）。3:呈色：培养 3-5 天后，每孔加 MTT 溶液（5mg/ml 用 PBS 配）20ul.继续孵育 4小时，终止培养，小心吸弃孔内培养上清液，对于悬浮细胞需要离心后再吸弃孔内培养上清液。每孔加 150ulDMSO，振荡 10 分钟，使结晶物充分融解。4：比色:选择 490nm 波长，在酶联免疫检测仪上测定各孔的光吸收值，记录结果，以时间为横坐标，吸光值为纵坐标来绘制细胞生长曲线。510.5!0.5.02s2.1.10.D.1e-1le+Q1e441e+5-^e+€Cells/wfiU«TS4 餐省Caco2HCT116「Panc-1注意事项：（1）选择适当的细胞接种浓度。（2）避免血清干扰：一般选小于 10％的胎牛血清的培养液进行试验。在呈色后尽量吸尽孔内残余培养液。（3）设空白对照：与试验平行，不加细胞只...