华 南 师 范 大 学 实 验 报 告学生姓名黄淑兰学号20132501115专业生物科学年级、班级13 科一课程名称分子生物学实验实验项目基因组 DNA 的提取、电泳检测和DNA 浓度测定实验类型□验证 □设计 □综合实验时间2016 年 3 月 25 日实验指导老师张铭光、梁山实验评分实验四：基因组DNA的提取、电泳检测和DNA浓度测定一、实验目的1．理解真核生物基因组DNA 提取的一般原理
2．掌握基因组 DNA 提取的方法和步骤
3．掌握 DNA 浓度、纯度的检测和计算方法
二、实验原理1．CTAB 法提取纯化 DNA 的原理：阳离子去污剂的CTAB ，可使细胞破裂，且在高离子强度的溶液 (如>0
7mol/L NaCl) 中，与蛋白质和多聚糖形成复合物，但不沉淀核酸
通过有机溶剂（如苯酚、氯仿）抽提，使蛋白、多糖、酚类等杂质溶于有机相而被去除
氯仿可更好地去除水相中剩余的苯酚
NaAc 的 Na 中和 DNA 的负电荷利于 DNA 聚集
CTAB 具有从低离子强度溶液中沉淀核酸
乙醇使DNA 变性沉淀，使核酸分离出来
2．紫外分光光度法检测核酸的浓度、纯度的基本原理： 嘌呤、嘧啶碱基具有共轭双健系统(－C＝C 一 C＝C 一)，能够强烈吸收 250~280nm 波长的紫外光
核酸 (DNA ，RNA) 的最大紫外吸收值在 260nm 处
遵照朗伯比尔（ Lambert-Beer）定律，可以从紫外光吸收值的变化来测定核酸的含量
单链核酸（RNA ）由于其碱基暴露，所以其吸光度较双链（DNA ）高
在不同 pH 溶液中嘌呤、嘧啶碱基互变异构的情况不同，紫外吸收光也随之表现出明显的差异，它们的摩尔消光系数也随之不同
所以，在测定核酸物质时均应在固定的pH 溶液中进行
三、实验材料、设备和试剂1．材料：花椰菜2．设备：移液器，高速离心机，水浴锅，培养箱，超微量紫外分
