华 南 师 范 大 学 实 验 报 告学生姓名黄淑兰学号20132501115专业生物科学年级、班级13 科一课程名称分子生物学实验实验项目基因组 DNA 的提取、电泳检测和DNA 浓度测定实验类型□验证 □设计 □综合实验时间2016 年 3 月 25 日实验指导老师张铭光、梁山实验评分实验四：基因组DNA的提取、电泳检测和DNA浓度测定一、实验目的1．理解真核生物基因组DNA 提取的一般原理。2．掌握基因组 DNA 提取的方法和步骤。3．掌握 DNA 浓度、纯度的检测和计算方法。二、实验原理1．CTAB 法提取纯化 DNA 的原理：阳离子去污剂的CTAB ，可使细胞破裂，且在高离子强度的溶液 (如>0.7mol/L NaCl) 中，与蛋白质和多聚糖形成复合物，但不沉淀核酸。通过有机溶剂（如苯酚、氯仿）抽提，使蛋白、多糖、酚类等杂质溶于有机相而被去除。氯仿可更好地去除水相中剩余的苯酚。 NaAc 的 Na 中和 DNA 的负电荷利于 DNA 聚集。 CTAB 具有从低离子强度溶液中沉淀核酸。乙醇使DNA 变性沉淀，使核酸分离出来。2．紫外分光光度法检测核酸的浓度、纯度的基本原理： 嘌呤、嘧啶碱基具有共轭双健系统(－C＝C 一 C＝C 一)，能够强烈吸收 250~280nm 波长的紫外光。 核酸 (DNA ，RNA) 的最大紫外吸收值在 260nm 处。遵照朗伯比尔（ Lambert-Beer）定律，可以从紫外光吸收值的变化来测定核酸的含量。单链核酸（RNA ）由于其碱基暴露，所以其吸光度较双链（DNA ）高。在不同 pH 溶液中嘌呤、嘧啶碱基互变异构的情况不同，紫外吸收光也随之表现出明显的差异，它们的摩尔消光系数也随之不同。所以，在测定核酸物质时均应在固定的pH 溶液中进行。三、实验材料、设备和试剂1．材料：花椰菜2．设备：移液器，高速离心机，水浴锅，培养箱，超微量紫外分光光度计，自动凝胶成像分析仪。3． 试剂： 2% CTAB 提取缓冲液，Tris-HCl (pH8.0) ，NaCl ，EDTA ，苯酚，氯仿，异戊醇，NaAc，乙醇， TE 缓冲液 (PH 为 8.0)， RNase 四、实验步骤1．提取菜花基因组DNA：1） 取菜花组织（体积如 2 黄豆），加入 2ml CTAB 抽提缓冲液，用玻璃匀浆器充分匀浆2-3min，然后转移 700ul 的匀浆液至一支 1.5ml 离心管中， 65℃水浴约 45min。2）加入 700ul 的氯仿 /异戊醇（ 24:1），上下轻轻摇动2-3min。3）12000g 离心 10min，取 400~500ul 上清液转移至一支1.5ml 离心管中。4）加入 1/10 体积的 NaAc（3mol/L...
