病毒感染力的滴定(TCID50的测定)VIP免费

概念：半数感染量(medianinfectivedose,ID50)表示在规定时间内，通过指定感染途径，使一定体重或年龄的某种动物半数感染所需最小细菌数或毒素量。一、实验目的了解病毒感染力测定的几种常用方法，掌握半数细胞培养物感染量TCID50的操作步骤、计算方法及含义。50二、测定病毒感染力的方法半数致死量 LD50(50%lethaldose):用动物或鸡胚来检测半数鸡胚感染量 EID50(egg50%infectivedose):用鸡胚来检测半数细胞培养物(tissue，组织)感染量 TCID50(50%tissuecultureinfectivedose)：用细胞来检测蚀斑形成单位(plaqueformingunit，PFU):用细胞来检测三、材料1、长满单层的细胞 1 瓶2、胰酶、吸球、吸管、生长液3、96 孔细胞培养板4、加样器、枪头5、病毒液(PRV)四、TCID50的操作步骤501、在青霉素瓶或离心管中将病毒液作连续 10 倍的稀释，从 10-1-10-10。2、将稀释好的病毒接种到 96 孔微量培养板中，每一稀释度接种一纵排共 8 孔，每孔接种 100 川。3、在每孔加入细胞悬液 100 川，使细胞量达到 2~3X105个/ml。4、设正常细胞对照，正常细胞对照作两纵排。(100 川生长液+100川细胞悬液)5、逐日观察并记录结果，一般需要观察 5-7 天。病毒感染力的滴定(的测定)6、结果的计算，按 Reed-Muench 两氏法或 Karber 法五、TCID50的计算方法501、Reed-Muench 两氏法病毒液稀释度出现 CPE 孔?数(致'cytopathiceffect,细胞病变效应)无 CPE 孔数累计出现 CPE 孔所占的％CPE 孔数无 CPE 孔数10-180270100(27/27)10-280190100(19/19)10-37111191.6(11/12)10-4354640(4/10)10-5171130.7(1/14)10-6080210(0/21)CPE：Cytopathiceffect(细胞病变效应距离比例=(高于 50%病变率的百分数-50%)/(高于 50%病变率的百分数-低于 50%病变率的百分数)=(91.6-50)/(91.6-40)=0.8lgTCID50=距离比例 X 稀释度对数之间的差+高于 50%病变率的稀释度的对数怎么计算？查看下例 karber 法计算=0.8x(-1)+(-3)=-3.8TCID=10-3.8/0.lml50含义：将该病毒稀释 103-8接种 100 川可使 50%的细胞发生病变。2、Karber 法病毒液稀释度出现 CPE 的孔数出现 CPE 孔的比率10-188/8=110-288/8=110-377/8=0.87510-433/8=0.37510-511/8=0.12510-600/8=0lgTCID50=L-d(s-O.5)L：最高稀释度的对数(-1)D：稀释度对数之间的差(lg10-i-lg10-2=1)S：阳性孔比率总和(1+1+0.875+0.375+0.125=3.375)|gTCID50=-1-1x(3.375-0.5)=-3.875TCID50=10-3-875/0'1ml含义：将...