土壤酶活性测定方法1、土壤 脲酶的测定方法（苯酚钠—次氯酸钠比色法）一、原理脲酶存在于大多数细菌、 真菌和高等植物里。 它是一种酰胺酶作用是极为专性的，它仅能水解尿素，水解的最终产物是氨和二氧化碳、水。土壤脲酶活性，与土壤的微生物数量、有机物质含量、全氮和速效磷含量呈正相关。根际土壤脲酶活性较高，中性土壤脲酶活性大于碱性土壤。人们常用土壤脲酶活性表征土壤的氮素状况。土壤中脲酶活性的测定是以脲素为基质经酶促反应后测定生成的氨量，也可以通过测定未水解的尿素量来求得。本方法以尿素为基质，根据酶促产物氨与苯酚—次氯酸钠作用生成蓝色的靛酚，来分析脲酶活性。二、试剂1）甲苯2）10%尿素：称取10g 尿素，用水溶至100ml。3）柠檬酸盐缓冲液（）：184g 柠檬酸和氢氧化钾（KOH）溶于蒸馏水。将两溶液合并，用 1mol/LNaOH将 PH调至，用水稀释定容至1000ml。4）苯酚钠溶液 （L）：苯酚溶于少量乙醇，加2ml 甲醇和丙酮，用乙醇稀释至100ml（ A液），存于冰箱中；27gNaOH溶于 100ml 水（ B 液）。将 A、B溶液保存在冰箱中。使用前将A液、 B 液各 20ml 混合，用蒸馏水稀释至100ml。5）次氯酸钠溶液：用水稀释试剂，至活性氯的浓度为%，溶液稳定。6）氮的标准溶液：精确称取硫酸铵溶于水并稀释至1000ml，得到 1ml 含有氮的标准液；再将此液稀释10 倍（吸取 10ml 标准液定容至100ml）制成氮的工作液 （ml）。三、操作步骤称取 5g 土样于 50ml 三角瓶中，加1ml 甲苯，振荡均匀，15min 后加 10ml10%尿素溶液和 20ml PH 柠檬酸盐缓冲溶液，摇匀后在37℃恒温箱培养24 小时。培养结束后过滤， 过滤后取 1ml 滤液加入 50ml 容量瓶中， 再加 4ml 苯酚钠溶液和3ml 次氯酸钠溶液，随加随摇匀。20min 后显色，定容。 1h 内在分光光度计与578nm波长处比色。（靛酚的蓝色在1h 内保持稳定）。标准曲线制作：在测定样品吸光值之前，分别取0、1、3、 5、 7、9、11、13ml氮工作液，移于50ml 容量瓶中，然后补加蒸馏水至20ml。再加入 4ml 苯酚钠溶液和 3ml 次氯酸钠溶液，随加随摇匀。20min 后显色，定容。 1h 内在分光光度计上于578nm波长处比色。然后以氮工作液浓度为横坐标，吸光值为纵坐标，绘制标准曲线。注意事项 :1、每一个样品应该做一个无基质对照，以等体积的蒸馏水代替基质，其他操作与样品实验相同，以排除土样中原有的氨对实验结果的影响。2、整个实验设置一个无土对照...
