1、细胞培养上清：即在4℃下，首先 300×g 离心 10 min，吸取上清液，然后 2 000 ×g 离心 10 min ；吸取上清液后， 10 000×g 高速离心 30 min ，吸取上清液； 140000×g 超速离心 90 min ；除去上清液，所获得的沉淀即为外泌体。用PBS缓冲液洗涤沉淀并重悬后， 140 000×g 再次离心 90 min ，100 μ L PBS缓冲液重悬沉淀，冻存于 - 80℃备用。2、将小鼠或人血收集在1.5mL 管中，并使其在37℃下凝结 1 小时而不进行抗凝。此后，将其以 2,000 ×g 离心持续 10 分钟获得血清。接着将血清以 3,000 ×g 离心 10 分钟。 将上清液以无菌 PBS以 1：1 的比例稀释并离心再次以10,000×g 保持 30 分钟，然后以 200,000×g 进行 2 小时超速离心。 将颗粒在 a中洗涤大量 PBS，通过 0.2- μ m注射器过滤器过滤，并以200,000×g 离心 1 小时，然后收集沉淀并重悬于PBS或 PBS中用于后期功能或生化测定的培养基。3、为了从体液（例如尿液，支气管肺泡灌洗液， 血清，血浆，肿瘤腹水）中纯化外泌体，只需通过常规方法收集液体即可。 血浆用紫色的管子，EDTA抗凝，血清的话不抗凝直接离心。在4° C 下在玻璃瓶中储存长达 5 天，直至进行外泌体纯化。外泌体纯化的原理与从组织培养条件培养基开始时的原理相同，但由于某些流体的粘度，必须稀释它们，并增加离心的速度和长度。该方案已在作者的实验室中用于从人血浆中纯化外泌体（Caby等，2005）。基本方案 1 中指出的所有预处理也适用于该方案。材料液体（例如，血浆：通过 Ficoll离心与血细胞分离 ; 淋巴，血清，尿液，细支气管灌洗或肿瘤腹水）磷酸盐缓冲盐水（PBS;附录） 2A）冷冻离心机50 毫升聚丙烯离心管0.22 微米过滤装置（如 Steritop，Millipore）超速离心机和固定角度或摆动式转子（见表 3.22.1 ）适用于超速离心机转子的聚合物管或聚碳酸酯瓶（见表3.22 ） 0.1 ）注意：所有离心均应在4℃下进行。1. 用等体积的 PBS稀释液体。将稀释的液体转移到50 毫升管中。在2,000 ×g，4℃下离心 30 分钟。2. 将上清液转移到超速离心管或瓶中，没有颗粒污染 （参见基本方案1，步骤 3 注释）。在 12,000×g，4℃下离心 45 分钟。3. 小心地将上清液转移到超速离心管或瓶中（根据处理的液体体积，可参见表 3.22.1 中的管）。在 110,000×g，4℃下离心 2 小时。4. 将沉淀重悬于 1ml PBS中，并将其在其中一...
