基因毒性杂质介绍培训人：侯继鹏日期：19.08.14什么是基因毒性杂质1.为什么研究基因毒性杂质2.基因毒性杂质法规3.如何研究基因毒性杂质4.基因毒性杂质检测方法5.主要内容主要内容主要内容1.什么是基因毒性杂质定义能够直接或者间接与DNA的碱基发生化学反应的物质。导致DNA的突变，癌变产生。缩写GI、GTI（Genotoxicimpurities）或者PGI（PotentiallyGenotoxicimpurities）主要内容1.什么是基因毒性杂质常见GTI磺酸酯、硫酸酯、卤代烷烃苯胺类、硝基类、氨基甲酸乙酯化学基础绝大部分GTI是亲电试剂，其亲电基团会对DNA的碱基造成破坏，进而导致染色体的变异。通常GTI亲电性越强，其毒性越大。主要内容1.什么是基因毒性杂质主要内容2.为什么研究GTI毒性高较低浓度可造成基因突变、肿瘤发生毒性强，对用药安全性产生强烈威胁法规要求ICH、FDA、EMA要求CDE发补、2020版药典要求主要内容3.基因毒性杂质法规•关于遗传毒性杂质限度指南的问答•适用新药、仿制药、原料药•不适用本身有毒API、晚期癌症药物•不适用生物制品、发酵产品、草药和动植物的粗制品肽类、寡核苷酸、放射性药物M7(R1)EMA（2010）主要内容4.怎么研究基因毒性杂质---来源01API中实际存在的杂质（0.05%）02API中潜在的杂质：起始物，中间体，化学试剂，及他们的杂质，副产物，降解杂质主要内容4.怎么研究基因毒性杂质---分类和限度作用数据来源最终使用值70年TTC定义当有确定TD50数据目的意义70年特异性化合物（TD50）主要内容4.怎么研究基因毒性杂质---分类和限度主要依据最后一步引入需要订入质量标准，倒数第二或者三步，第四步可以使用定量清除方法进行检查，倒数5步及以上的可以使用半定量的清除因子方法进行阐述，进行预测杂质残存情况，如果CDE不同意，则需要定量清除方法进行检测。化学反应性（反应难易）溶解性（是否析出）杂质产生步骤离子化（成盐能力）挥发性（沸点情况）杂质产生步骤主要内容4.怎么研究基因毒性杂质---风险评估方法1在终产品中进行控制GTI限度，订入质量标准常规检测项：测试GTI含量低于限度或者进行周期检测：6批中试批或者3批商业批检测低于限度的30%方法2在起始物料或者中间体中控制GTI限度（同方法1限度）订入起始物料或者中间体质量标准主要内容4.怎么研究基因毒性杂质---控制策略方法3在起始物、中间体中控制高于GTI的限度，订入其质量标准1）对实验室规模进行加标实验（分析杂质的去向和被清除的情况），证明API中杂质的水平低于可接受的限度的30%，终产品不订标准2）必要时对中试或商业批检测，控制限度30%内，终产品不订标准方法4理论论证（5个因素），不需要研究不订入质量标准主要内容4.怎么研究基因毒性杂质---控制策略HPLC-UV常见检测方法HPLC-MSHPLC-MS/MSGC-MS/MSGC主要内容5.基因毒性杂质检测方法1.依据GTI挥发性、限度、灵敏度选择仪器2.必要时进行衍生化主要内容5.基因毒性杂质检测方法HPLC仪器GC仪器主要内容5.基因毒性杂质检测方法HPLC-MS/MS仪器GC-MS/MS仪器主要内容5.基因毒性杂质检测方法---质谱注意离子源气质使用EI/CI电离源，EI得到分子离子峰(M），更易得碎片离子,CI得到准分子离子峰液质使用ESI/APCI电离源，得到准分子离子峰敏感性注意控制温度18-21度，否则容易发生质量数的偏移质谱灵敏度较高，使用容量瓶、稀释液注意防止污染流动相（LC-MS）有机相：甲醇、乙腈水相：超纯水+（甲酸、乙酸、甲酸铵、乙酸铵、氨水）禁止使用：不挥发性盐、离子对试剂、表面活性剂等谢谢！
