黄艳甲型肝炎病毒IgM抗体的测定(捕获法)酶联免疫吸附试验（ELISA法）将抗体(抗原)包被在固相表面后，按不同的步骤加入待测抗原(抗体)和酶标抗体(抗原)，充分反应后用洗涤的方法，使固相上形成的抗原抗体复合物与其他物质分离，洗去游离的酶标抗体(抗原)，最后加入底物，根据酶对底物催化的显色反应程度，而对标本中的抗原(抗体)进行定性或定量。ELISA类型夹心法间接法测抗体竞争法捕获法捕获法测IgM抗体血清中针对某些抗原的特异性IgM常和特异性IgG同时存在，后者会干扰IgM抗体的测定。因此测定IgM抗体多用捕获法包被抗体：用抗人μ链抗体包被固相载体上,形成固相抗人μ链;加入病人的血清标本;加入特异性抗原试剂;，加入针对特异性抗原的酶标抗体，加底物显色．免疫球蛋白的结构基本结构：四肽链结构基本结构：四肽链结构由两条相同的轻链由两条相同的轻链（（LightChainLightChain）和）和两条相同的重链两条相同的重链（（HeavychainHeavychain））通过链间二硫键连通过链间二硫键连结形成。结形成。分子式为：分子式为：H2L2H2L2四条肽链两端游离四条肽链两端游离的的NH2NH2和和COOHCOOH方向一致分别命名方向一致分别命名为为NN端和端和CC端端（一）轻链和重链轻链（L链）κ链λ链轻链决定型别κ型λ型正常人κ：λ≈2：1重链（重链（HH链链））::根据其抗原性的差异，人类根据其抗原性的差异，人类IgIg的的HH链分为链分为链链链链链链链链链链重链决定重链决定IgIg类别类别IgGIgAIgMIgDIgEIgGIgAIgMIgDIgE捕获法主要用于血清中某种抗体亚型成分（如IgM）的测定。实验原理•用抗人μ链抗体包被酶标板，用以捕获血清中IgM类抗体，然后用特异性HAVAg与IgM抗体结合，再加酶标抗HAV抗体，最后加底物显色，显色深浅与HAVIgM的含量成正相关。操作步骤1．将微孔条固定在支架上，按顺序编号。2．分别将待测标本，阴、阳性对照100μl（2滴）加入相应的孔中，设空白对照孔。置37℃20分钟。3．洗涤：甩去孔内液体，用洗涤液注满各孔，静置5秒，共三次，每次洗后均需扣干。4．每孔加HA·Ag50μl，酶结合物50μl（空白对照除外），振荡混匀，置37℃20分钟。5．洗涤：重复上述36．显色：每孔加显色剂A液50μl，再加显色剂B液50μl，振荡混匀，置3715℃分钟。7.每孔加终止液50μlCutoffvalue(临界值)Cutoffvalue(临界值)：阴阳性判断值，简称CO值。夹心法：若S/CO值>1，为阳性；S/CO值<1，为阴性；竞争抑制法：若S/CO值<1，为阳性；S/CO值>1，为阴性。要点：要点：1.HAV1.HAV的传播途径的传播途径((粪粪——口口))2.HAV2.HAV的潜伏期的潜伏期(30(30天天±2±2周周))3.3.血清标志物出现的规律血清标志物出现的规律4.4.免疫学检测指标免疫学检测指标——HAVAgHAVAg抗抗HAVHAV总抗体总抗体抗抗HAV-IgMHAV-IgM临床意义•血清中抗HAVIgM出现于感染的早期(发病后数日)抗体的效价很快升到峰值并持续较长时间(2-4周),经1-2个月后抗体的效价和阳性率明显不降,于3个月后消失.因此抗HAVIgM阳性,尤其是效价较高时,表明处于感染的早期,被公认为早期诊断甲肝的依据,是区别是急性感染还是慢性感染的有力佐证。
