免疫抑制模型VIP免费

报告人：赵淑锐（immunity）“Immune”是从拉丁字“immunis”衍生而来，其原意是免除服役或免除课税之意。免疫：指机体接触“抗原性异物”或“异己成分”的一种特异性生理反映，其作用是识别和排除抗原性异物，以此维持机体的生理平衡。这些维持机体稳定性的反应，通常对机体是有利的；但在某些条件下也可以是有害的。所以免疫的现代概念可以概括的指机体识别和排除抗原性异物的功能。免疫系统中的免疫细胞和免疫分子之间，以及与其它系统如神经内分泌系统之间的相互作用，使得免疫应答以最恰当的形式维持在最适当的水平。免疫调节剂免疫增强剂免疫抑制剂免疫抑制剂？选择性抑制T细胞，作用于T细胞活化的早期，对B细胞抑制抑制巨噬细胞产生IL-1抑制抗原或有丝分裂素激活淋巴细胞对NK细胞无明显抑制作用，但可间接通过干扰IFN-γ的产生而影响NK细胞表达IL-2受体的活力作用较弱——小鼠耳后心肌组织移植模型——脾淋巴细胞对丝裂原的增殖反应——巨噬细胞吞噬试验1963年Fulmer等人就已经开始研究心肌组织的移植，并对其1971年Judd和Trentin两人又对模型进行了精化1981年上海免疫研究所史美浩等人又对该模型进行了探讨1997年ThomasA.Fey等人再次对该模型进行了优化进行了深入的研究实验动物：受体鼠（Balb/c）(10±2)周、体重(20±2)g、雄性供心鼠（C57BL/6J）48小时内性别不限手术器械：眼科剪、刀片、缝针、缝线镊子、培养皿、纱布、棉签注射器（1ml）试剂：10%乌拉坦1%新洁尔灭酊Hank’s液仪器：生理记录仪或心电图机或体显微镜4、持镊子向耳尖方向钝性分离皮下组织，使1、受体鼠经10%乌拉坦(10毫克/10克体重)腹腔注射麻醉2、1%新洁尔灭酊耳廓局部消毒，剃毛3、持眼科剪于耳廓背侧中线之前1/3处作一与耳廓中线垂直处作一3-4毫米长的切口，勿损伤耳廓静脉之成一管腔(见图1)4、将新生供鼠置于碎冰中一分钟后用75%酒精皮肤消毒，剖胸摘取心脏。将心脏置于无菌Hank’s液内搏动1-2次以排空心腔余血。5、移植时，用刀片把供心纵向剖成为基本等大二半，肌纤维成一斜面。将心肌组织移植填入受体鼠耳腔内，将皮肤切口缝合一针。（心肌组织的离体时间不超过2分钟）6、用手指轻按局部，使移植物与受鼠之周围组织贴紧。3、测试异位心电图时，正负电极分别置于移植心脏两侧，接地极连接在小鼠后肢(图2)1、移植术后当天给药，每日给药2、术后第六日起每天记录移植心肌组织的心电信号仪器：200目钢网、注射器芯、96孔板、Biorad酶标仪、表面皿动物：小鼠药品：ConA或LPSMTT试剂：Hank’s液、RPMI-1640培养液、DMSO、红细胞裂解液小鼠颈椎脱位处死后，将小鼠全身浸入75％乙醇中浸泡2－3分钟消毒，无菌条件下取出脾脏，用注射器芯经200目无菌不锈钢筛网研磨，过尼龙膜使之成单细胞悬液，Hank‘s液冲洗，收集分离的脾细胞悬液，1000r/min离心5分钟，弃上清；加红细胞裂解液10ml，混匀脾细胞，静止4-5分钟，待红细胞完全破碎，1000r/min离心5分钟，弃上清去除红细胞，Hank’s液洗2-3遍，用RPMI1640培养液重悬细胞，计数调整细胞浓度为3×106个/ml。加100μl细胞悬液于96孔板中（每孔含5×105个）。每孔加25μlConA或LPS（ConA浓度5μg/mlLPS浓度10μg/ml）,每孔加10μl药物（3个复孔）37℃，5%CO2培养48小时。结束培养前4小时每孔加5mg/mlMTT10μl，1000r/min离心30分钟，弃上清每空加入DMSO200μl溶解，振荡，Biorad酶标仪在波长570nm处测OD值。抑制率：平均ODConA或LPS对照给药组平均OD平均ODConA或LPS对照试剂：Hank’s液、RPMI-1640培养液、3%硫代乙醇酸钠动物：BAlb/c小鼠仪器：注射器、96孔板、Biorad酶标仪、表面皿溶液(1.5ml)0.1%中性红、细胞溶解液（乙醇：乙酸=1：1）•BAlb/c小鼠腹腔注射硫代乙醇酸钠溶液1.5ml，四小时后断颈处死，浸于75酒精溶液中消毒。向腹腔内注射消毒Hank’s液约8ml，轻揉小鼠腹部，剪开小鼠腹部外层皮肤，用注射器将腹腔液抽出，置于消毒离心管中。收集的腹腔液经离心(2000r/min，5min)沉淀后，用Hank‘s液洗两次，用含10%小牛血清的RPMI1640培养液重悬制成细胞悬液(2x106细胞/ml)。•每孔加100μl细胞悬液于96孔板中，每孔加10μl待侧药物（5个复孔），37℃，5%CO...