染色体畸变分析染色体畸变分析（（ChromosomeAberrationAnalysis)ChromosomeAberrationAnalysis)哈尔滨医科大学公共卫生学院卫生毒理学教研室任锐毒理学基础实验课化学毒物致突变类型化学毒物致突变类型??复复习习染色体畸变染色体畸变染色体数目改变染色体数目改变基因突变基因突变碱基置换碱基置换移码突变移码突变转换转换颠换颠换毒理学基础实验课复复习习遗传学终点遗传学终点::基因突变基因突变染色体畸变染色体畸变染色体组畸变染色体组畸变DNADNA原始损伤原始损伤AmesAmes实验实验微核实验微核实验染色体畸变分析染色体畸变分析染色体畸变分析染色体畸变分析分子生物学方法分子生物学方法毒理学基础实验课小鼠骨髓细胞染色体畸变分析试验小鼠骨髓细胞染色体畸变分析试验毒理学基础实验课1.1.学习动物骨髓细胞标本制作。学习动物骨髓细胞标本制作。2.2.了解动物体内染毒及染色体畸变类型。了解动物体内染毒及染色体畸变类型。一、目的一、目的毒理学基础实验课当某种化学物质作用于染色体并使其固有的数目和形态结构发生改变时，称为染色体畸变。具有这种能力的化学物质可能对生物体产生潜在性的远期危害。因此，应用小鼠骨髓细胞染色体畸变分析实验可以检测化学物质能否引起哺乳动物体细胞染色体畸变，以及畸变的性质和强弱。二、原理毒理学基础实验课三、器材与试剂三、器材与试剂见教材。见教材。毒理学基础实验课1.动物选择选用18g~24g雄性健康小鼠，每组6~10只。2.染毒与取样时间一般染毒一次或多次，多次更为合理。末次染毒后24h处死动物，收获细胞。3.剂量最高剂量最大耐受剂量或，1/3~1/8LD50；最低剂量应为最大给药量或人使用量的50~100倍；阴性对照组给予40mg/kg环磷酰胺（腹腔注射）；阴性对照给予溶剂。4.给药途径原则上采用与人接触受试物相同的途径。四、实验设计毒理学基础实验课1.1.注射秋水仙素注射秋水仙素2.2.骨髓细胞的制备骨髓细胞的制备3.3.低渗低渗4.4.固定固定5.5.制片制片6.6.干燥干燥7.7.染色染色五、操作步骤五、操作步骤毒理学基础实验课注射秋水仙素骨髓细胞制备：取股骨，PBS5ml冲洗骨髓细胞，1500r/min，离心10min，弃去上清。低渗：0.4%氯化钾水溶液5ml，37℃低渗30min，1000r/min，离心10min，弃去上清。固定：加入3：1甲醇和冰醋酸溶液5ml,再用乳头吸管反复吹打，静止15min后，以1000r/min离心10min，弃上清。制片：用乳头吸管吸取混匀的细胞悬液，从玻片上方3cm~5cm处滴片，每张片子滴2~3滴细胞悬液，使细胞自然分散。干燥：将制好的片子置空气中自然干燥，并做好标记染色：Giemsa染色15min水冲干燥，阅片毒理学基础实验课低倍镜、高倍镜和油镜。低倍镜、高倍镜和油镜。计数计数100100个分裂中期相细胞。个分裂中期相细胞。染色体数目和染色体结构。染色体数目和染色体结构。六、染色体分析阅片六、染色体分析阅片毒理学基础实验课七、结果评价七、结果评价%100%%100%分析的染色体总数畸变染色体总数）染色体畸变率（分析染色体的细胞总数有染色体畸变的细胞数）细胞畸变率（毒理学基础实验课八、组织分工毒理学基础实验课八、总结毒理学基础实验课掌握正常小鼠的骨髓染色体数目和形态。掌握正常小鼠的骨髓染色体数目和形态。毒理学基础实验课低渗时间十分重要，时间太短则染色体分散不开，低渗时间十分重要，时间太短则染色体分散不开，无破裂，染色体丢失。无破裂，染色体丢失。每次离心后弃上清时应仔细，注意不要将管底的沉每次离心后弃上清时应仔细，注意不要将管底的沉渣吸出，以免最后分析时剩余的细胞数过少。渣吸出，以免最后分析时剩余的细胞数过少。毒理学基础实验课阳性结果的判定：每只小鼠分析100个骨髓细胞。实验组畸变率与阴性对照组比较，并进行统计分析，如果实验组的畸变率显著高于阴性对照组，并有剂量反应关系，则可认为该受试物对小鼠骨髓细胞有致染色体畸变的作用。毒理学基础实验课
