染色体涂染的技术VIP专享VIP免费

染色体涂染技术染色体涂染技术Chromosomepaintingtechniques染色体涂染技术染色体涂染技术染色体涂染技术染色体涂染技术即将整条染色体、某条染即将整条染色体、某条染色体臂（长臂或短臂）或者染色体某个片断的色体臂（长臂或短臂）或者染色体某个片断的DNADNA制备成探针制备成探针，然后用，然后用荧光原位杂交荧光原位杂交的方法，的方法，将探针杂交到中期分裂相染色体上，在荧光显微将探针杂交到中期分裂相染色体上，在荧光显微镜下观察荧光素在染色体上标记的颜色，从而分镜下观察荧光素在染色体上标记的颜色，从而分析和研究染色体的重组、畸变以及同源基因等的析和研究染色体的重组、畸变以及同源基因等的一种新技术。一种新技术。染色体涂染技术染色体涂染技术1.1.染色体染色体DNADNA探针的制备；探针的制备；2.2.荧光原位杂交。荧光原位杂交。1.1.染色体染色体DNADNA探针的制备探针的制备①①流式细胞分类法；流式细胞分类法；②②克隆基因库或体细胞杂交株；克隆基因库或体细胞杂交株；③③染色体显微切割和染色体显微切割和PCRPCR扩增等途径。扩增等途径。1.1.染色体染色体DNADNA探针的制备探针的制备①①流式细胞分类法流式细胞分类法（（flowcytometrflowcytometryy））该法是用一种或多种荧光染料将悬浮液该法是用一种或多种荧光染料将悬浮液中中的中期分裂相染色体染色。由于染色体大小、的中期分裂相染色体染色。由于染色体大小、形态、组成和结构的不同，所染色的特征有其形态、组成和结构的不同，所染色的特征有其特异性，从而可以通过流式细胞术将特定的染特异性，从而可以通过流式细胞术将特定的染色体收集起来。色体收集起来。1.1.染色体染色体DNADNA探针的制备探针的制备①①流式细胞分类法流式细胞分类法（（flowcytometryflowcytometry））局限性：如果受试物的染色体形态单一、局限性：如果受试物的染色体形态单一、数数目较多，如牛目较多，如牛(2n=60)(2n=60)和狗和狗(2n=78)(2n=78)的所有常染的所有常染色体及绵羊色体及绵羊(2n=54)(2n=54)和马和马(2n=64)(2n=64)的大部分常染的大部分常染色体都是端位着丝点，因此，仅根据染色体的形色体都是端位着丝点，因此，仅根据染色体的形态和大小很难将所有的染色体准确地区分开来。态和大小很难将所有的染色体准确地区分开来。1.1.染色体染色体DNADNA探针的制备探针的制备②②克隆基因库或体细胞杂交株克隆基因库或体细胞杂交株通过特定的克隆基因文库或者特异性的体通过特定的克隆基因文库或者特异性的体细胞细胞杂交细胞系制备某条染色体整个或部分杂交细胞系制备某条染色体整个或部分DNADNA探针。探针。该法特异性强，准确性高，并且可以与功能遗传该法特异性强，准确性高，并且可以与功能遗传学的研究结合起来，但对实验室要求较高，取材学的研究结合起来，但对实验室要求较高，取材来源和研究范围有所限制。来源和研究范围有所限制。11..染色体染色体DNADNA探针的制备探针的制备③③染色体显微切割和染色体显微切割和PCRPCR扩增扩增显微切割显微切割(microdissection)(microdissection)技术是在显技术是在显微微状态或显微镜直视下直接或通过显微操作系统对状态或显微镜直视下直接或通过显微操作系统对欲选取的材料进行切割分离并收集用于后续研究欲选取的材料进行切割分离并收集用于后续研究的技术。的技术。染色体显微切割分手工切割和激光切割法，染色体显微切割分手工切割和激光切割法，倒置显微镜上装配切割臂，安上硅化玻璃针，找倒置显微镜上装配切割臂，安上硅化玻璃针，找到分散良好的分裂相来切割所需染色体片段。到分散良好的分裂相来切割所需染色体片段。11..染色体染色体DNADNA探针的制备探针的制备③③染色体显微切割和染色体显微切割和PCRPCR扩增扩增早在上世纪早在上世纪7070年代，染色体显微切割已应用于多线年代，染色体显微切割已应用于多线染染色体的研究，是细胞生物学常用的实验方法之一。当时由色体的研究，是细胞生物学常用的实验方法之一。当时由于无法直接扩增染色体于无法直接扩增染色体DNADNA，，所以必须在显微镜下反复所以必须在显微镜下反复切割若干拷贝的染色体，才能...