. . 细胞传代培养 一.实验目的 初步掌握哺乳动物细胞的原代培养与传代培养的基本操作过程,为生物技术在医学上的 应用打下基础。 二、原理 从生物体中取出某种组织或细胞,模拟体内生理条件,在人工培养条件下使其生存、生 长、繁殖或传代,这一过程称为细胞培养。细胞培养技术的最大优点是使我们得以直接观察 活细胞,并在有控制的环境条件下进行实验,避免了体内实验时的许多复杂因素,还可以与 体内实验互为补充,可同时提供大量生物性状相同的细胞作为研究对象,耗费少,比较经济, 因此成为生物学研究的重要手段。 细胞培养可分为原代培养和传代(继代)培养。直接从体内获取的组织细胞进行首次培养为 原代培养;当原代培养的细胞增殖达到一定密度后,则需要做再培养,即将培养的细胞分散 后,从一个容器以 1:2 或其他比率转移到另一个或几个容器中扩大培养,为传代培养,传 代培养的累积次数就是细胞的代数。 细胞培养是一种程序复杂、要求条件多而严格的实验性工作。所有离体细胞的生长都受 温度、渗透压、ph 值、无机盐影响,消毒、配液等均有严格的规X 和要求,特别是无菌操 作是细胞培养成败的关键。 三、材料和试剂 1、细胞:293 细胞株 2、试剂:0.25 %胰酶、1640 培养基〔含10 %小牛血清〕 3、仪器和器材:倒置显微镜,培养箱、电动枪,培养板,吸液枪,5ml 玻璃吸管、酒精 灯等 四、操作步骤 1、将长满细胞的培养板中原来的培养液吸去。 2、加入1~2ml 0.25%胰酶溶液,使板底细胞都浸入溶液中。 3、马上吸走胰酶液 ,再次加入2ml 左右的胰酶,同样马上吸去,再加入几滴胰酶放入 培养箱中消化几分钟 4、用吸管将贴壁的细胞反复吹打成悬液,再按照 观察的生长情况确定的传代比例传代 5. 根据确定的比例来取需要的量〔剩余的细胞拿来做细胞计数〕,加入4ml 左右的培养液 6. 前后左右的来回震荡使细胞分散均匀后,将培养板放入培养箱 7. 收拾整理超净台 附:消化液配制方法: 称取 2.5 克胰酶蛋白酶,加入100ml10xpbs+纯水溶解到1l ,滤器过滤除菌,4℃ 保存, 用前可在37 ℃ 下回温。 10x pbs配方:na2hpo4(14.2g) kh2po4(2.32g) nacl(80g) kcl(2.02g) (调 至 ph=7.4 〕 五、实验结果 细 胞 传 代 实 验 报 告 --第 1页细 胞 传 代 实 验 报 告 --第 1页. . 传代后的细胞在2 小时左右就能附着在培养瓶壁上,2 天左右就在瓶内形成单层, ...